Medio Condicionado de Órganos: Medio Generador de Células de Órganos Recolectadas para Estudios de Cáncer Metastásico

0 vistas3:01 min • April 30th, 2023

Ciertos órganos producen factores solubles y se convierten en sitios preferenciales para la metástasis del cáncer de mama. Un medio condicionado preparado a partir de estas células de órganos extraídos puede ayudar a identificar y estudiar dichos factores.

Comience colocando un órgano extraído, como un hígado, en un tubo que contenga PBS frío y volteando el tubo hacia arriba y hacia abajo para eliminar la sangre residual del órgano. Coloque el órgano en una placa de Petri. Y con un bisturí, corta el órgano en trozos pequeños.

Vuelva a suspender estas piezas en un tubo que contenga un medio basal complementado con un antibiótico para apoyar el crecimiento celular y evitar la contaminación. Ahora, vierta la suspensión celular en una placa de cultivo e incube a 37 grados centígrados con un suministro continuo de dióxido de carbono durante el tiempo requerido.

Durante la incubación, estas células liberan metabolitos, factores de crecimiento y proteínas de la matriz extracelular en el medio. A continuación, transfiera la suspensión celular a un tubo de centrífuga y agregue medio fresco para diluirlo. Centrifuga el tubo y filtra el sobrenadante, que es el medio acondicionado, en un tubo nuevo.

En el siguiente protocolo, prepararemos medios acondicionados de los pulmones y el cerebro del ratón para estudiar el comportamiento metastásico de las células de cáncer de mama.

Para generar el medio acondicionado para el pulmón, invierta los tubos de tejido pulmonar tres veces para eliminar la sangre residual de los órganos. Luego reemplace el lavado con PBS fresco y frío y repita hasta que la solución salina esté libre de sangre.

A continuación, transfiera los pulmones a una placa de Petri de vidrio de 60 milímetros cuadrados por ratón y use dos hojas de bisturí estériles para picar los tejidos con cortes repetidos de un lado a otro.

Cuando los fragmentos de tejido tengan un tamaño aproximado de 1 milímetro cúbico, vuelva a suspender los trozos en el volumen adecuado de medio DMEM/F-12 suplementado con antibióticos e incube los tejidos en un pocillo de una placa de 6 pocillos por ratón a 37 grados Celsius y 5% de CO2.

Después de 24 horas, transfiera todo el contenido de cada pocillo a tubos cónicos individuales de 50 mililitros y diluya el medio acondicionado con tres volúmenes equivalentes de medio DMEM/F-12 fresco por tubo.

Centrifuga los tubos para eliminar cualquier pedazo grande de restos de tejido. A continuación, agrupe los medios acondicionados a través de un colador de jeringa de 0,22 micras en un solo tubo cónico de 50 mililitros.

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Última actualización: 22 agosto 2026