JoVE Encyclopedia of Experiments
Investigación sobre el cáncer
0 vistas • 3:07 min • April 30th, 2023
Comience colocando un ratón eutanasiado con el lado ventral hacia arriba en una cama quirúrgica y asegurando las extremidades del animal. Con unas tijeras, corte a lo largo de la línea media a través de la caja torácica hasta las glándulas salivales. Coloque la punta de una pipeta debajo de la tráquea para elevarla y aislarla. Gire el lecho quirúrgico 180 grados. Inserte una aguja de jeringa que contenga una mancha de tinta china en la tráquea e inyecte la tinta en los pulmones hasta que sienta resistencia.
Las células cancerosas segregan una gran cantidad de ácido láctico que genera una fuerte carga negativa en la superficie celular. Cuando estas células se tiñen con tinta china, una tinción ácida, la superficie celular repele la mancha y permanece sin teñir.
Use unas tijeras para cortar la tráquea y deslice un par de pinzas debajo de los pulmones. Tire suavemente de los pulmones fuera del cuerpo del animal. Enjuague los pulmones con agua y transfiéralos a un vial que contenga la solución de Fekete para eliminar el exceso de mancha y fijar el tejido en una campana extractora. Los nódulos tumorales aparecen blancos sobre el fondo oscuro.
En el siguiente protocolo, realizaremos la técnica de inflado de tinta china para validar la metástasis pulmonar.
Para validar la metástasis del tumor primario en el pulmón, primero coloque al ratón en posición supina sobre una tabla de poliestireno y asegure las patas para garantizar un acceso sin obstrucciones a la tráquea. Rocíe el ratón con etanol al 70%. Luego, use un par de tijeras para hacer una incisión a lo largo de la línea media de la parte media del abdomen del ratón a través de la caja torácica y hacia las glándulas salivales. Identifica la tráquea. Luego, use fórceps para extraer los tejidos circundantes.
A continuación, sosteniendo la punta de una pipeta con una mano, pase la punta por debajo de la tráquea y levante suavemente el tejido hacia arriba y lejos del cuerpo. Manteniendo la tráquea elevada, gire la plataforma de disección 180 grados. Luego, inserte una jeringa de tuberculina de calibre 27 de medio cc en la tráquea e infle completamente los pulmones con tinta china hasta que se sienta una fuerte resistencia.
Luego, con unas tijeras, corta la tráquea. Sosteniendo el ratón en su lugar con una pinza, inserte otra pinza debajo de los pulmones y extraiga los lóbulos pulmonares del ratón. Enjuague los pulmones brevemente en un vaso de precipitados con agua y transfiera el pañuelo a una campana extractora. Luego, coloque los pulmones en un frasco de centelleo de vidrio que contenga 3 mililitros de la solución de Fekete, tapando el vial para evitar que la solución se evapore. Después de unos minutos, transfiera los pulmones a una placa de Petri y cuente el número de nódulos tumorales metastásicos blancos únicos.
Este artículo detalla un protocolo para validar metástasis pulmonar en un modelo murino utilizando la técnica de inflado con tinta de India. El método implica procedimientos quirúrgicos para aislar la tráquea e inflar los pulmones con tinta de India, lo que permite la visualización de nódulos tumorales metastásicos.
La visualización cuantitativa de nódulos tumorales metastásicos en modelos preclínicos es fundamental para validar la progresión de la enfermedad y evaluar hipótesis terapéuticas. El método de inflado con tinta de la India permite la detección y enumeración clara de metástasis pulmonares, apoyando una validación sólida de objetivos y la reducción de riesgos mecanicistas en las líneas de investigación oncológica. Este enfoque fortalece la confianza predictiva en puntos clave de descubrimiento y etapas preclínicas, orientando las decisiones sobre el avance de carteras de desarrollo.
La técnica de inflado con tinta de la India se integra en el continuo de descubrimiento en oncología, desde la validación inicial de dianas hasta los estudios preclínicos de eficacia.
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Última actualización: 22 agosto 2026