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La presión intersticial del fluido o IFP es la fuerza ejercida por el fluido en los espacios entre las células de un tejido. En primer lugar, anestesiar un ratón portador de tumores con un 2% de isofluorano mezclado con oxígeno e inmovilizarlo en la plataforma robótica de tomografía computarizada o CT-IFP. Ahora, inyectar en la vena lateral de la cola de un ratón con liposomas encapsulados con un agente de contraste para visualizar el tumor. Regresa al animal a su jaula y deja que se recupere.
Entre 48 y 72 horas después de la inyección, asegure el ratón anestesiado en la plataforma CT-IFP y seleccione algunas posiciones espaciadas uniformemente en el tumor para medir la IFP. A continuación, enjuague la aguja del sistema IFP con una solución salina de heparina antes de la inserción. Coloque la aguja en la posición seleccionada e insértela dentro del tejido tumoral.
Ahora adquiera imágenes en todas las posiciones y mida el IFP utilizando el software. El IFP en el tumor suele ser alto debido a su naturaleza densa, vasos sanguíneos anormales y sistema linfático defectuoso. Esto puede conducir a la acumulación de liposomas en la periferia del tumor. En el siguiente protocolo, demostraremos la técnica para medir el IFP en un tumor sólido.
Para medir el IFP, coloque cinta adhesiva al animal en la plataforma del robot CT-IFP, de modo que el tumor quede inmovilizado y sea accesible para el sistema del robot CT-IFP. Obtenga una micro tomografía computarizada anatómica como se acaba de demostrar, luego cargue los datos de inserción previa a la aguja en el software de alineación del robot CT-IFP y ajuste la ventana y el nivel para visualizar el tumor. Haga clic en el borde del tumor en cualquier imagen, seguido de la selección de una segunda ubicación del borde en el lado adyacente del tumor.
El software calculará una serie de posiciones a lo largo de una línea lineal entre los dos puntos. A continuación, seleccione las coordenadas x, y y z para una serie de cinco a ocho posiciones espaciadas uniformemente de la lista. A continuación, enjuague la aguja del sistema IFP con una solución salina de heparina e introduzca las primeras posiciones predeterminadas de la aguja en las ventanas de coordenadas XYZ del software de control del robot CT-IFP.
Presione el botón Ir para mover el robot a la ubicación deseada. Luego, para cada posición de la aguja a su vez, haga clic en el botón Insertar aguja para insertar la aguja en el pañuelo. Apriete y suelte el tubo de PE-20 para confirmar una buena comunicación fluida entre la aguja IFP y el tejido y observe que la medición de IFP aumenta y vuelve al valor previo al pinzamiento en el software de adquisición IFP. Finalmente, obtenga una tomografía computarizada anatómica con la aguja insertada, haciendo clic en el botón Retraer aguja al final de la exploración para retirar la aguja del tejido.
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