Disociación mecánica: un método para obtener células viables a partir de un tejido

Primero, pesa un fragmento de tejido y mide su longitud, anchura y altura. Coloque el tejido en una placa de cultivo con un medio de cultivo y córtelo en trozos pequeños con un bisturí. Transfiera todo a un tubo en C para homogeneizar con una pipeta Pasteur.

Coloque el tubo en un disociador mecánico y ejecute los ciclos según sea necesario. El aparato utiliza fuerzas mecánicas para extraer células individuales viables de la muestra de tejido mientras mantiene la integridad celular, incluidas las proteínas de la superficie. Decantar el homogeneizado a través de un colador de células fijado en un tubo de centrífuga.

Vuelva a homogeneizar el tejido restante y cuele el homogeneizado a través del filtro de células en el tubo. Centrifugar el homogeneizado y eliminar el sobrenadante. Ahora, vuelva a suspender el pellet celular en el medio de cultivo y transfiera una pequeña cantidad de la suspensión celular a un tubo que contenga tinción de azul de tripano.

Después de la tinción, transfiera las células a un portaobjetos de hemocitómetro. Cuente las células viables transparentes. Las células muertas absorben la mancha, ya que su membrana celular no está intacta. En el siguiente protocolo,