Ensayo de formación de colonias de agar blando: un método para probar los efectos de nuevos compuestos en la proliferación de células cancerosas

Para comenzar, tome una concentración adecuada de agarosa fundida en un tubo cónico y agregue la cantidad deseada de medio de cultivo caliente. Invierta suavemente para mezclar el contenido. Agregue esta mezcla en cada pocillo de un plato de seis pocillos y deje que se solidifique. Esta es la capa inferior. A continuación, trate las células cancerosas con el compuesto de interés y agregue la concentración requerida de agarosa.

Ahora, vierta esta mezcla que contiene el número deseado de células por mililitro en cada pocillo. Se trata de una capa que contiene células. Una vez que el medio se solidifique, incube la placa a 37 grados centígrados durante una semana. Prepare una capa alimentadora mezclando agarosa con el medio y complemente esta mezcla con el compuesto de interés. Agregue suavemente esta capa de alimentación en cada pocillo, deje que se solidifique e incube la placa a 37 grados centígrados.

Repita este procedimiento de alimentación semanalmente para reponer las células con el medio hasta que se formen colonias. Si el compuesto de interés es un inhibidor de la tumorigénesis, suprimirá el crecimiento de las células, lo que dará lugar a pocas colonias en los pozos. En el si