Ensayo de inmunofluorescencia CTC: una técnica para caracterizar las células tumorales circulantes
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 4:05 min. • April 30th, 2023
- Para comenzar, diluya las células tumorales circulantes aisladas o CTC a la concentración requerida utilizando una solución antiadherente que proteja las células del cizallamiento del líquido y el daño por presión. A continuación, ensamble un portaobjetos de microscopio recubierto de polilisina y una tarjeta de filtro de citocentrífuga en un conjunto de embudo de citocentrífuga. Transfiera la suspensión de la celda al puerto del embudo del ensamblaje seguido de la citocentrifugación.
La fuerza centrífuga concentra y deposita una monocapa de células en un área circular en el portaobjetos. Aísle el área depositada con células usando un aislador de silicona. Una vez secas, fije las células con paraformaldehído. A continuación, incube las células con una solución de bloqueo adecuada que contenga proteínas que se unan fácilmente a cualquier sitio de unión no específico en la superficie celular.
Ahora, etiquete las células con una solución de anticuerpos marcada con fluorescente de interés. Los anticuerpos marcados con fluoróforos reconocen y se unen a moléculas diana específicas en la superficie celular. Lave la muestra para eliminar los anticuerpos no unidos. Agregue una solución de
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