Inflado de agarosa en todo el pulmón: un método de preparación de los pulmones para la obtención de imágenes en vivo ex vivo

- Primero, coloque un ratón sacrificado en una tabla de disección. Justo encima del abdomen, corte a través de la piel y el peritoneo. Perfore el diafragma y corte a lo largo de las costillas y la caja torácica hasta la tráquea. Haz una pequeña incisión en la tráquea. Inserte suavemente una aguja dentro de la tráquea sin lesionar la carina y asegúrela con pinzas. Inyecte agarosa de bajo punto de fusión a temperatura corporal normal dentro de los pulmones. Retire lentamente la jeringa y mantenga la aguja adentro para evitar el reflujo de agarosa.

Vierta PBS frío en los pulmones para promover la gelificación de la agarosa. Retire la aguja y sujete la tráquea con pinzas para evitar el reflujo de agarosa no solidificada. Corta el esternón, sujeta la tráquea con pinzas y córtala con unas tijeras. Extrae los pulmones de la cavidad torácica. Separe los lóbulos en el medio. Colocar dentro de pozos de imágenes en condiciones fisiológicas para microscopía. La agarosa preserva la morfología pulmonar a temperaturas fisiológicas que ayudan a observar las interacciones celulares vivas. En el siguiente protocolo, demostraremos imágenes en vivo ex vivo de pulmones para estudiar las interacciones e