Aumento de dosis: un método para desarrollar resistencia a los medicamentos en las células cancerosas

- Los inhibidores de la tirosina quinasa, TKI, bloquean el receptor de la quinasa para que no se una al ATP, evitando la fosforilación. Comience con la siembra de células cancerosas en medios de crecimiento. Permita que alcancen una densidad favorable y transfieran las células a múltiples pozos. Después del crecimiento durante la noche, dispense diferentes concentraciones de fármaco en varios pocillos y deje que las células crezcan durante el tiempo deseado. Agregue MTT, un tinte soluble en agua, para medir la viabilidad celular. Las enzimas mitocondriales convierten el MTT en formazano púrpura insoluble dentro de las células vivas.

Detenga la reacción añadiendo un agente solubilizante adecuado y mida el formazano espectrofotométricamente. Este método se denomina ensayo MTT. Traza un gráfico de las células vivas indicadas por formazano frente a las concentraciones del fármaco. Calcule la concentración inhibitoria, IC₅₀, encontrando la concentración del fármaco que mata el 50% de las células utilizando el software.

A continuación, cultive células cancerosas en el medio de crecimiento y distribúyalas en tres placas diferentes. Después de que las células alcancen la subconfluencia, ag