Ensayo de extracción de ARN: un método para extraer ARN de células de cáncer de pulmón transfectadas con miARN

- Para empezar, siembra las células de cáncer de pulmón en un matraz en T que contenga un medio de cultivo de tejidos y déjalo crecer durante la noche. A continuación, suspenda el miARN con un agente transfector en un medio transfectador. Retire el medio y agregue un medio de transfección que introducirá miARN en las células cancerosas. El miARN es una molécula de ARN no codificante que se une a una secuencia complementaria de ARNm y bloquea la expresión génica. Incubar el matraz durante el tiempo deseado.

A continuación, reemplace los medios con medios de cultivo de tejidos y crezca durante la noche. Agregue tripsina para la disociación celular. Transfiera la mezcla a un tubo de centrífuga que contenga PBS y centrifuérela. Retire el sobrenadante y agregue tampón de lisis para lisar las células y agregue etanol ultrapuro para la precipitación. Coloque la mezcla en una columna separadora para purificar el ácido nucleico y centrifugar.

Retire el flujo y agregue un tampón de lavado para eliminar la membrana celular lisada y la centrífuga. Retire el tampón de lavado y agregue DNasa con tampón de digestión de DNasa para eliminar el ADN de la muestra y la centrífuga. Agregue tampón de pr