Análisis del ciclo celular: un enfoque para estudiar la regulación del ciclo celular de las células de cáncer de pulmón transfectadas con miARN

- Un microARN o miARN es un ARN pequeño no codificante. Después de la transfección o introducción de ARNm en una célula, forma un complejo de proteínas de miARN. El complejo se dirige y se une a ARNm específico y regula negativamente su expresión, deteniendo la progresión del ciclo celular.

Para comenzar el análisis, agregue un fijador deshidratante adecuado a un cultivo recolectado de células de cáncer de pulmón transfectadas con miARN. El fijador preserva las células y también permeabiliza la membrana celular. Trata las células con una mezcla de yoduro de propidio, un colorante de ácido nucleico fluorescente y la enzima ribonucleasa.

El tinte entra en las células y tiñe tanto el ADN como el ARN. Las enzimas degradan específicamente el ARN, lo que permite una cuantificación óptima del ADN. Utilice un citómetro de flujo para determinar la proporción de células detenidas en diferentes fases del ciclo celular en función de la intensidad de fluorescencia de las células individuales.

Las células en las fases de reposo y crecimiento tienen un menor contenido de ADN y, por lo tanto, una menor intensidad de fluorescencia. Las células en la fase Gap 2 con el doble de cantidad de ADN produc