Tinción inmunohistoquímica: un método para obtener información espacial a partir de secciones delgadas de tejido
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 4:52 min. • April 30th, 2023
- Comience colocando una sección delgada de tejido en una solución de amoníaco para permitir una recuperación suave del antígeno. Transfiera la sección a un portaobjetos recubierto de polilisina. Las células cargadas negativamente se unen a la polilisina cargada positivamente. A continuación, agregue peróxido de hidrógeno para bloquear la actividad de la peroxidasa endógena. Lave el portaobjetos con solución salina Tris-Buffered, TBS.
El TBS promueve el acceso de los anticuerpos a los antígenos mediante la ruptura de los enlaces cruzados de proteínas. Lave la sección con una solución de bloque para reducir la unión de anticuerpos inespecíficos. Agregue anticuerpos primarios a la sección e incube durante la noche. El anticuerpo primario se une a su antígeno específico presente en la superficie celular. Lave el portaobjetos con TBS.
Agregue anticuerpos secundarios conjugados con biotina que se unen a la región Fc del anticuerpo primario. Lave la sección con la enzima estreptavidina-biotina peroxidasa. A continuación, agregue sustrato cromogénico de peroxidasa al tejido. La peroxidasa convierte el cromógeno en un producto insoluble coloreado.
Contratinción del tejido con solución de h
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