Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:59 min. • April 30th, 2023
- La terapia fotodinámica o TFD es un tratamiento basado en la luz que involucra moléculas fotosensibilizadoras. Estas moléculas son activadas por luces de longitudes de onda específicas y convierten el oxígeno molecular presente en las células en especies reactivas de oxígeno que inducen la muerte celular. Para empezar, desarrolle un modelo de ratón portador de un tumor de pulmón inyectando la concentración adecuada de suspensión de células de cáncer de pulmón en el flanco inferior de un ratón anestesiado. Vigile hasta que un tumor crezca a un volumen adecuado.
Posteriormente, prepare una suspensión del fotosensibilizador deseado cargado en un sistema de administración basado en nanopartículas dirigidas al cáncer de pulmón. Inyecte esta suspensión en la vena de la cola de un ratón anestesiado portador de tumores. Proporcionar tiempo suficiente para que el fotosensibilizador que contiene nanopartículas llegue al sitio del tumor e ingrese a las células cancerosas.
A continuación, anestesia al ratón. Coloque un láser PDT a una distancia óptima por encima del tumor para garantizar una iluminación uniforme de todo su volumen. Irradiar el tumor a una longitud de onda apropiada para el tiempo deseado. Mantenga al ratón dentro de una jaula en la oscuridad durante 24 horas. Controlar los cambios diarios en el volumen del tumor. Los ratones portadores de tumores irradiados a los que se les inyectó el fotosensibilizador mostraron una disminución del volumen tumoral. En este protocolo, analizaremos la eficacia antitumoral de la hipocrelina B, un fotosensibilizador, encapsulado en nanopartículas de ceramida de ácido hialurónico en ratones portadores de tumores A549.
Coseche células A549 y vuelva a suspender un millón de células en 0,1 mililitros de medio RPMI 1640. Coloque las celdas resuspendidas en hielo. A continuación, prepare un ratón desnudo masculino BALB/C para la inyección. A continuación, cargue las células en una jeringa de 1 mililitro equipada con una aguja de calibre 26 e inyéctelas en el flanco izquierdo del ratón. Mida el tamaño del tumor con pinzas todos los días.
Cuando el tamaño del tumor alcance aproximadamente 200 milímetros cúbicos de volumen, comience el experimento pesando primero cada ratón. A continuación, disuelva las nanopartículas en PBS hasta una concentración final de 2 miligramos por mililitro y cargue un microlitro de la suspensión por gramo de ratón en una jeringa de 1 mililitro equipada con una aguja de calibre 26. Inyecte las nanopartículas a través de la inyección en la vena de cola en los días cero y siete.
24 horas después de cada inyección, anestesiar al ratón y colocar el tumor debajo de la fibra de terapia fotodinámica para que quede a un centímetro de la fibra.
Es importante cubrir toda la superficie del tumor con la luz para lograr el mejor resultado.
Póngase las gafas de seguridad láser, apague el interruptor de la habitación e ilumine el tumor con un láser de terapia fotodinámica durante 500 segundos tanto el primer como el octavo día. Después del tratamiento con láser, mantenga a los ratones en sus jaulas en la oscuridad durante 24 horas. Controle visualmente el volumen del tumor y los cambios en el sitio del tumor todos los días. Use calibradores para medir el tamaño del tumor y tome imágenes de los sitios del tumor todos los días para verificar si hay alteraciones en la superficie.