Aislamiento de exosomas: una técnica para separar exosomas del plasma de pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 4:21 min. • April 30th, 2023
- Los exosomas son pequeñas vesículas unidas a la membrana que transportan biomoléculas como lípidos, proteínas, ADN, ARNm y microARN. Los exosomas son liberados por diferentes tipos de células en espacios extracelulares y pueden aislarse de biofluidos como el plasma.
Para comenzar, centrifuga la muestra de plasma para eliminar las células y los desechos. Transfiera el sobrenadante de plasma a un tubo nuevo. Tratar el plasma con la concentración deseada de la enzima ribonucleasa. Incubar la muestra en un bloque calefactor a 37 grados centígrados durante un tiempo adecuado.
La enzima degrada cualquier ARN libre en la muestra, mientras que el ARN exosomal permanece protegido. Diluir la muestra con PBS. A continuación, agregue la concentración deseada de solución de enzima proteinasa K e incube a 37 grados centígrados durante un tiempo adecuado. La proteinasa K degrada la mayor parte de las proteínas plasmáticas. También inactiva la enzima ribonucleasa previamente añadida, eliminando así el riesgo de degradación del ARN exosomal durante el procesamiento posterior.
Añadir un volumen adecuado de tampón de precipitación de exosomas para facilitar la separación de los exosomas del plasma.
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