Instilación y fijación pulmonar: introducción de líquido en la tráquea y fijación de los pulmones para medir el volumen pulmonar fijado

- La instilación pulmonar se utiliza para introducir sustancia directamente en la tráquea para analizar pulmones de ratón con cáncer u otras patologías. Primero, coloque un ratón anestesiado en una plataforma de intubación inclinada y afeite el vello del cuello. Haga una pequeña incisión con una tijera debajo del cuello y tire suavemente de la piel con pinzas para revelar la tráquea. Inserte un catéter en la tráquea a través de la boca y obsérvelo a través de una incisión. Inyecte un ejemplo de líquido en la tráquea e infle rápidamente los pulmones introduciendo aire con una jeringa vacía para distribuir el líquido correctamente.

Cierre la herida y coloque el ratón en una cámara de recuperación. Después del período deseado, sacrifique el ratón y exponga los pulmones. Inflarlo con fijador para cuantificar la capacidad pulmonar total. Coloque los pulmones en un tubo con un fijador. Mide el volumen pulmonar fijo utilizando el principio de Arquímedes. Coloque los pulmones en el agua y presiónelo con un dispositivo con cable. Nótese el peso del agua desplazada por los pulmones sumergidos. La fracción del volumen pulmonar en el pulmón izquierdo fijo suele ser menor que la medida in vivo.

- Antes de comenzar el procedimiento, doble manualmente la punta de una cánula intravenosa comercial de calibre 20 de 1 pulgada de largo en una ligera curva. Luego, después de confirmar la anestesia por falta de respuesta al pellizco de los dedos de los pies, aplique ungüento en los ojos de un ratón adulto y asegure al ratón en posición supina en una plataforma inclinada con una carpeta de oficina grande y bucles de sutura. Afeitar la parte ventral del cuello y desinfectar la piel con alcohol al 70%. Luego, con unas tijeras afiladas, haga una pequeña incisión quirúrgica en el cuello, aproximadamente 12 milímetros por debajo del incisivo inferior.

A continuación, utilice fórceps para tirar suavemente de la piel del cuello caudalmente hasta que se pueda ver la pared ventral de la tráquea. A continuación, retraiga suavemente la lengua e inserte la cánula con la punta doblada inclinada hacia la superficie ventral del ratón. Tirando suavemente de la piel del cuello de nuevo como se acaba de demostrar, inserte la cánula en la tráquea. Cuando se pueda observar el catéter en la tráquea, avance el catéter unos 5 milímetros para pasar las cuerdas vocales.

Ahora coloque la punta de una pipeta de carga de gel cargada con 50 microlitros del instilado en el cubo inferior del catéter. Confirme el movimiento del líquido en la punta sincrónico con la respiración del ratón, luego inyecte el instilado. Con una jeringa de 1 mililitro, infle inmediatamente los pulmones con 0,6 mililitros de aire a través del catéter para ayudar a distribuir el líquido en lo profundo de los pulmones y luego retire la cánula. Cerrar la herida quirúrgica con una pequeña cantidad de adhesivo de cianoacrilato y colocar al ratón en una jaula individual con seguimiento hasta que se recupere por completo.

Después del último punto de tiempo experimental, haga un pequeño corte en el cuello del animal para exponer el lado ventral de la tráquea. A continuación, inserte la punta de una aguja de calibre 18 en la tráquea. Con hilo, ate la aguja en la tráquea y abra cuidadosamente el tórax con una incisión en la línea media. A continuación, corte el diafragma y retire las paredes torácicas laterales para exponer el pulmón. A continuación, asegúrese de que no haya aire en el tubo de fijación colocando formaldehído en el extremo de la llave de paso. A continuación, conecte el depósito de formalina y el tubo lleno directamente al extremo inferior de la aguja de traqueostomía.

Coloque la superficie superior del formaldehído a 25 centímetros por encima del nivel de la boca y abra la llave de paso para inflar los pulmones con un fijador. Después de dejar los pulmones bajo presión durante al menos 20 minutos, tire lentamente de la aguja hacia atrás para exponer más de la tráquea no anulada mientras ata la tráquea más allá del extremo de la aguja corta. Cuando la tráquea esté bien atada, retire la llave de paso y diseccione cuidadosamente los pulmones. Luego coloque los pulmones en formaldehído durante la noche.

Aquí, se muestra un dispositivo típico para mantener los pulmones en su lugar durante el volumen pulmonar fijo hecho de pipetas de plástico y alambre delgado de calibre 20. Para medir el volumen pulmonar fijo, primero diseccione el corazón y cualquier otro tejido no pulmonar de los pulmones. A continuación, coloque un vaso de precipitados que contenga aproximadamente 200 mililitros de agua equipado con un dispositivo de soporte de alambre sobre una balanza y tara el equipo.

Luego, retire el dispositivo, coloque el pulmón en la superficie del agua y use el dispositivo para presionar el tejido debajo del agua, teniendo cuidado de que el pulmón, la sutura o cualquier parte del dispositivo no toque los lados o la parte inferior del vaso de precipitados. Registre el peso en la balanza. Este número refleja el volumen de agua desplazada y, por lo tanto, es una medida directa del volumen pulmonar. A continuación, seque el pulmón con un limpiaparabrisas, vuelva a tarar el vaso de precipitados con el dispositivo y repita la medición del volumen pulmonar. A continuación, se deben promediar las dos mediciones de volumen.