PECES DE ADN 3D: una técnica para localizar un gen específico en un cromosoma

- Tomar un alambre funcionalizado con células adheridas en su superficie y teñidas mediante tinción de inmunofluorescencia. Lávelo con una solución salina helada, de citrato de sodio o SSC. Coloque el cable en un microtubo que contenga sondas marcadas con fluorescencia y ciérrelo con un tapón de cable. Incubar el microtubo en una cámara oscura y húmeda en un horno de hibridación a 75 grados centígrados para desnaturalizar el ADN dentro de las células.

Transfiera la cámara a un horno a 37 grados centígrados para que las sondas se unan a la secuencia complementaria en el ADN. A continuación, retire la cámara del horno y saque el alambre. Sumerja el alambre en un tubo que contenga solución de SSC a la temperatura deseada. Lave el alambre con la solución SSC que contiene Tween para eliminar las sondas inespecíficas o parcialmente hibridadas, y lave nuevamente con agua destilada.

Seque el alambre e incube la punta funcionalizada en una solución de DAPI para teñir los núcleos de la célula. Enjuague el cable en PBS y séquelo al aire. Coloque el alambre bajo un microscopio de fluorescencia. La sonda hibridada con el gen de interés aparece como una mancha fluorescente en los núcleos de la c