Injerto de islotes pancreáticos: un método para implantar islotes pancreáticos en la cámara anterior del ojo de ratón para obtener imágenes in vivo

- Los islotes pancreáticos contienen células beta que secretan insulina. En los pacientes con diabetes tipo 1, las células beta productoras de insulina se vuelven disfuncionales. El trasplante de islotes en estos pacientes ofrece el potencial de proporcionar control glucémico. Para evaluar la eficiencia del trasplante, utilizamos modelos animales como un ratón cuya cámara ocular anterior es un sitio óptimo para el injerto y la obtención de imágenes in vivo.

Para el trasplante de islotes, se coloca un ratón anestesiado sobre una almohadilla térmica tibia e inyecta buprenorfina, un analgésico para aliviar el dolor, por vía subcutánea en la parte posterior del ratón. A continuación, inserte la nariz del ratón en una máscara nasal para obtener un suministro continuo de oxígeno e isoflurano anestésico.

Fije la cabeza del ratón en el soporte para la cabeza para exponer el ojo y retraiga suavemente el párpado con pinzas romas para sacar el ojo. Cargue una cánula con islotes marcados con fluorescencia. Inserte la mitad de la cánula en la córnea. Levante la córnea, dispense suavemente los islotes, retire la cánula y aplique gel para los ojos.

Después de la duración deseada, coloque el mouse bajo un microscopio de dos fotones y tome imágenes. Puede observar que los vasos sanguíneos forman una red microvascular a lo largo del injerto. En el siguiente protocolo, realizaremos un injerto de islotes pancreáticos humanos en la cámara anterior del ojo del ratón.

Para comenzar, coloque el mouse en una almohadilla térmica tibia, colóquelo en el soporte para la cabeza y colóquese la máscara nasal. Use el pulgar y el dedo índice para levantar ligeramente la cabeza. Sujétalo con las piezas metálicas de los laterales, asegurándote de que los auriculares fijen la cabeza directamente debajo de las orejas. Por vía subcutánea, inyecte la solución de buprenorfina en la parte posterior del ratón. Suavemente, retraiga los párpados del ojo que se va a trasplantar con pinzas romas. Saca el ojo y fíjalo sin apretar con un par de pinzas cubiertas con un tubo de polietileno.

Después de transferir los islotes a una placa de Petri con PBS, recoja aproximadamente de 20 a 30 islotes en la cánula ocular. Con una aguja de calibre 25, biselar hacia arriba, inserte con cuidado la punta en la córnea y haga una sola incisión lateral. Levante con cuidado la córnea con la cánula precargada con islotes y libere lentamente los islotes en el ojo. Retraiga lentamente la cánula y aplique gel ocular en el ojo.

Después de 10 minutos, retire las pinzas que sujetan el párpado y vuelva a colocar el ojo en su posición normal. Para obtener imágenes de islotes humanos implantados con microscopía de dos fotones, coloque la plataforma de soporte de la cabeza debajo del microscopio y administre gel ocular sobre el ojo como un líquido de inmersión entre la córnea y el cristalino. Coloque el ojo debajo del objetivo e imagine los islotes humanos implantados como se describe en el manuscrito del texto.