Electroporación de organoides: un método para transfectar el ADN plasmídico en organoides gastrointestinales

- Los organoides son diminutos cultivos celulares tridimensionales derivados de células madre específicas de tejidos. Son genómicamente estables pero modificables genéticamente a través de la transfección y, por lo tanto, ideales para la investigación genética. Para la transfección, siembre los organoides en una placa de cultivo multipocillo con un medio de cultivo específico e incube durante el tiempo deseado. A continuación, agregue una mezcla de disociación a la placa para ayudar a la disociación de las células organoides. Transfiera la mezcla a un tubo y centrifuga. Vuelva a suspender el gránulo de organoide en un tampón de electroporación que contenga ADN plasmídico marcado con fluorescencia. El tampón estabiliza las células y evita la muerte celular debido al estrés eléctrico.

Transfiera la mezcla a una cubeta y electropore las celdas. Los impulsos eléctricos a través de la membrana celular dan como resultado la formación temporal de poros para facilitar la absorción de ADN plasmídico en la célula. Después de la electroporación, agregue inmediatamente el medio de cultivo a la suspensión celular y transfiera la mezcla a un tubo. Ahora, centrifuga las células. Vuelva a suspende