Aislamiento de islotes pancreáticos mediante perfusión de colagenasa: un método enzimático para aislar células de islotes pancreáticos

- Las células de los islotes del páncreas producen hormonas esenciales implicadas en las funciones endocrinas. Para aislar los islotes, primero, asegure un ratón sacrificado y exponga quirúrgicamente su cavidad abdominal. Cepille el hígado y los intestinos para localizar y pinzar el conducto biliar común. Identificar la ampolla de Vater, el conducto formado por la unión de los conductos pancreáticos y biliares comunes.

A continuación, inyecte una solución de enzima colagenasa en el conducto biliar común. El reflujo del conducto infla con éxito el páncreas, lo que facilita la disociación de los tejidos pancreáticos inducida por la colagenasa. Extirpe el páncreas en un tubo que contenga más solución de colagenasa. Picar mecánicamente el tejido e incubarlo para ayudar a la digestión del tejido por la colagenasa.

Una vez obtenida una suspensión homogénea, se detiene la digestión enzimática añadiendo una solución que contenga proteínas que inhiban la actividad de la colagenasa. Centrífuga para recoger una bolita de tejido. Vuelva a suspender el pellet en un medio de gradiente de densidad adecuado, coloque una capa de tampón adecuado sobre él y centrifugue para generar capas de gradiente