Tinción inmunofluorescente de esferoides: una técnica para analizar la expresión de esferoides para la expresión de antígenos intra y extracelulares

- Los esferoides son modelos tridimensionales de cultivo celular in vitro. Para la tinción inmunofluorescente, primero genere un cultivo de esferoides del tipo de célula requerido en una placa de pocillos múltiples. Con una micropipeta con una punta de orificio ancho, recoja los esferoides, teniendo cuidado de evitar rupturas debido a las fuerzas de cizallamiento.

A continuación, fije y permeabilice los esferoides para hacer permeables las células individuales. Ahora, incubar con una solución que contenga proteínas para bloquear los sitios de interacción de proteínas no específicos en la superficie celular. Trate los esferoides con un cóctel de anticuerpos primarios deseado. Incubar para que los anticuerpos se unan a las moléculas objetivo en la superficie celular.

A continuación, marque los esferoides con una solución de anticuerpos secundarios marcada con fluorescencia específica para los anticuerpos primarios. Por último, trate los esferoides con un colorante fluorescente adecuado de unión al ADN para teñir los núcleos celulares. Usando un microscopio de fluorescencia de barrido láser, obtenga imágenes de múltiples secciones transversales ópticas del esferoide en diferentes plan