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- Durante el trasplante de tumor con homoinjerto ortotópico, las células tumorales o los fragmentos de tumores de un donante canceroso se trasplantan a un receptor que pertenece a la misma especie en un órgano o sitio que coincide con el histotipo del tumor. Comience tomando un ratón donante anestesiado portador de un tumor, que contenga células de origen pancreático. Esterilizar el área y extraer quirúrgicamente el tumor. Lavar el pañuelo para eliminar la sangre y cortarlo en fragmentos. A continuación, coloque un ratón receptor anestesiado en posición lateral derecha y esterilice su área abdominal. Exponer quirúrgicamente el bazo.
A continuación, extraiga suavemente una parte del páncreas de debajo del bazo. Colocar el fragmento tumoral en el páncreas y suturarlos. Cierra el abdomen y deja que el ratón se recupere en una jaula. Monitoree diariamente al ratón receptor para observar el crecimiento del tumor pancreático ortotópico. En el siguiente protocolo, mostraremos el trasplante ortotópico de un homoinjerto de adenocarcinoma ductal pancreático de un ratón donante C57 negro 6 al páncreas de un ratón receptor C57 negro 6.
- Controle el peso corporal de los ratones C57 black 6 utilizando una balanza. Además, controle el volumen tumoral de los ratones donantes portadores de tumores mediante la medición con calibrador. Después de la eutanasia del animal en una capucha de riesgo biológico según el protocolo, esterilice la piel alrededor del tumor con hisopos de yodóforo. Después de extirpar quirúrgicamente el tumor como se detalla en el protocolo de texto, coloque el tumor en una placa de Petri que contenga 20 mililitros de PBS que se haya enfriado previamente a cuatro grados centígrados. Si hay sangre contaminante, transfiera el tumor a otra placa de Petri y lave el tumor con PBS.
Corta el tumor por la mitad. Elimine el exceso de piel, vasos, calcificación y/o necrosis. Elija solo fragmentos intactos del tumor y colóquelos en un tubo de centrífuga estéril de 50 mililitros. Agregue 20 mililitros de PBS antes de transportar el tubo a una sala separada para animales para estudios de farmacología. Para prepararse para la implantación ortotópica, fije el ratón completamente anestesiado en una placa de experimentación en la posición lateral derecha. Desinfecte la piel alrededor del bazo con yodo y luego desyodina con alcohol etílico al 75%.
Encuentre el punto medio del bazo y haga una incisión vertical de un centímetro en el abdomen para exponer el bazo. Extraiga suavemente una parte del tejido del páncreas debajo del bazo con pinzas de punta plana y suture una pieza tumoral de homoinjerto de ratón del ratón semilla en el páncreas del ratón receptor mediante una sutura quirúrgica absorbible 9-0. Cerrar el abdomen con una sutura de seda 6-0 por doble costura. Lograr la homeostasis por compresión.
Después de terminar la implantación del tumor, mantenga a los animales en una jaula caliente siempre y cuando no se produzca sangrado ni fuga de tejido tumoral. Vigile al animal hasta que recupere la conciencia suficiente para mantener el decúbito esternal. Regrese al animal a la sala de animales después de recuperarse por completo de la anestesia. Monitoree a los ratones portadores de tumores palpando el abdomen cerca del bazo y seleccione los ratones portadores de tumores ortotópicos.
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