Electroporación irreversible: una técnica para extirpar un tumor de páncreas en ratones

- La electroporación irreversible o IRE es una técnica para ablar tumores de páncreas mediante la administración de pulsos cortos y de alto voltaje de corriente eléctrica al tumor, causando daño permanente a las células tumorales. La IRE tiene una alta selectividad y accesibilidad para el área tumoral objetivo. No causa daño inducido por el calor a las células sanas cercanas, lo que lo convierte en una terapia antitumoral prometedora.

Comience colocando un ratón anestesiado en el costado y diseccione su cavidad abdominal para ubicar el tumor en la superficie del páncreas. A continuación, utilice los electrodos, colocando entre paréntesis el sitio del tumor, y administre pulsos específicos de corriente eléctrica durante el tiempo deseado. La corriente eléctrica más allá de un cierto umbral, provoca poros permanentes en la membrana celular de las células tumorales, impidiendo que la célula vuelva al estado de homeostasis.

Estos poros hacen que el contenido intracelular de la célula salga al exterior, lo que conduce a la muerte celular gradual por apoptosis. Ahora, cierra la cavidad abdominal y deja que el ratón se recupere en la jaula de casa. Por último, vigilar el páncreas para detectar la reducción del tamaño del tumor después de la electroporación. En el siguiente protocolo, demostraremos un método para realizar electroporación irreversible para interrumpir los tumores pancreáticos de ratones.

- Antes de que el tumor alcance los 6 milímetros de diámetro, coloque al animal anestesiado sobre su lado derecho para permitir el acceso al tumor y use una maquinilla y un hisopo con alcohol para limpiar el sitio del tumor. Con fórceps, eleve la piel directamente debajo del tumor e inserte dos electrodos de aguja a través de la piel, paralelos al cuerpo para sujetar el tumor, teniendo cuidado de que los electrodos no penetren en la cavidad peritoneal.

Configure el electroporador para que entregue pulsos de 100 microsegundos, a una frecuencia de 1 hercio, a 1.500 voltios por centímetro para un total de 150 pulsos y use el pedal para entregar los pulsos, separando cada conjunto de 10 pulsos por 10 segundos para permitir la disipación de calor entre cada conjunto de pulsos.

- Dado que los espasmos musculares se producen durante el parto de la IRE y son más pronunciados durante la serie inicial de pulsos, asegúrese de que los electrodos sigan en el lugar deseado y de que el animal siga sedado después de cada serie de pulsos.

- Después de no más de 200 segundos de dosificación, retire los electrodos y registre el voltaje real suministrado como se muestra en el electroporador. Luego, regresa el ratón a su jaula. Para la IRE de un tumor ortotópico, de 8 a 10 días después de la implantación del tumor, use pinzas de nariz roma para exteriorizar el tumor con las pinzas y capture firmemente el tumor con los electrodos de platino de la pinza.

Administre los pulsos de electroporación como se acaba de demostrar, manteniendo el tumor externalizado para el último conjunto de pulsos durante al menos 60 segundos para monitorear cualquier signo de hemorragia. A continuación, regrese el tumor a la cavidad abdominal y cierre la incisión como se ha demostrado, monitoreando al animal hasta que se recupere por completo.