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Investigación sobre el cáncer
0 vistas • 3:14 min • April 30th, 2023
- Las células madre del cáncer de páncreas, o CSC, son un subconjunto de células cancerosas que se renuevan por sí mismas y pueden dar lugar a todo el tumor. Las CSC residen en un nicho bien protegido que consta de otras células, como fibroblastos, células inmunitarias, células endoteliales y componentes de la matriz extracelular, como citocinas y factores de crecimiento. Las interacciones que ocurren entre las células en un entorno de este tipo ayudan a las CSC a propagarse y aumentar el crecimiento tumoral.
Para estudiar las propiedades de las CSCs, las aislamos de los tumores pancreáticos. Comience tomando la suspensión celular del tejido tumoral pancreático humano en un medio de crecimiento CSC. A continuación, siembre la suspensión, que consiste principalmente en fibroblastos y CSC, en una placa recubierta de gelatina e incube durante el tiempo deseado. Los fibroblastos se adhieren a la superficie de la gelatina, dejando las CSC que flotan libremente en la suspensión celular.
Tome una pequeña cantidad de suspensión celular y agregue azul de tripano. Pipetee esta mezcla en un hemocitómetro y cuente el número de células viables. El azul de tripán entra en las células muertas y las tiñe de azul, dejando las células vivas incoloras. Por último, guarde los CSC para su posterior análisis.
En el siguiente protocolo, aislaremos las CSCs de los tumores pancreáticos.
- Para aislar las células madre cancerosas de un adenocarcinoma ductal pancreático en un gabinete de bioseguridad estéril, use un bisturí estéril y pinzas para picar el tumor humano en una placa de cultivo de 60 x 15 milímetros que contenga un mililitro de PBS estéril, agregando otros tres a cuatro mililitros de PBS según sea necesario, hasta que el tejido esté completamente disociado.
Transfiera la suspensión de tejido a un tubo cónico estéril y agregue PBS hasta un volumen final de cinco mililitros. A continuación, homogeneizar mecánicamente la muestra con el disociador, centrifugar y digerir el tejido homogeneizado con colagenasa a 37 grados centígrados.
Después de una hora, centrifugar las células, resuspendiendo el pellet en 10 mililitros de medio completo. Filtre la suspensión celular a través de un colador de 40 micrómetros y gire las celdas nuevamente, esta vez resuspendiendo el pellet en cinco mililitros de ACK.
Después de cinco minutos a temperatura ambiente, retire el tampón de lisis de glóbulos rojos por centrifugación y vuelva a suspender el pellet en el medio de células madre cancerosas. Luego, incube las células en un plato recubierto de gelatina a 37 grados Celsius para eliminar la mayoría de las células fibroblásticas que se adhieren rápidamente. Después de una hora, recupere el sobrenadante y cuantifique el número de células de cáncer de páncreas viables.