Evaluación de focos de daño en el ADN: para identificar focos de daño en el ADN inducidos por radiación en líneas celulares cancerosas mediante tinción de inmunofluorescencia

- La radiación ionizante induce diferentes tipos de daños en el ADN, como las roturas monocatenarias o SSB y las roturas bicatenarias o DSB. Las roturas de cadena simple o SSB ocurren cuando la radiación daña las bases y escinde la columna vertebral del ADN, mientras que las roturas de doble cadena, DSB, se desarrollan cuando se producen dos SSB en hebras de ADN opuestas. El primer paso de la formación de DSB es la fosforilación de la histona H2AX, que se puede visualizar mediante tinción de inmunofluorescencia.

Para realizar la tinción de inmunofluorescencia, agregue anticuerpos primarios a una muestra fijada en un cubreobjetos colocado en una placa de Petri. Los anticuerpos se unen a la proteína histona fosforilada gamma-H2AX. Incubar la muestra y lavarla con PBS para eliminar los anticuerpos no unidos. A continuación, agregue anticuerpos secundarios portadores de fluoróforos, que reconocen los anticuerpos primarios y se unen a ellos. Añada la cantidad deseada de tinción fluorescente DAPI para contrarrestar la tinción de los núcleos.

Monte suavemente el cubreobjetos en un portaobjetos de vidrio con un medio de montaje y observe las células bajo un microscopio fluorescente. Los fo