Detección de ROS con tinción DCFH-DA: medición de ROS totales en líneas celulares de cáncer colorrectal

- Las especies reactivas de oxígeno se producen predominantemente a partir de las mitocondrias cuando los electrones se escapan de la cadena de transporte de electrones. Estos electrones se combinan con el oxígeno molecular dando lugar a varias especies de oxígeno reactivo, o ROS. En las células cancerosas, hay una sobreproducción de especies reactivas de oxígeno. Estas moléculas ROS altamente reactivas pueden dañar oxidativamente las membranas, las proteínas y el ADN dentro de la célula.

El aumento de los niveles de ROS daña el ADN, lo que conduce a la activación de una vía de señalización oncogénica que causa la progresión del cáncer. Por lo tanto, es vital detectar los niveles de especies reactivas de oxígeno producidas por las células cancerosas.

Comience tomando células cancerosas de cáncer colorrectal humano en un medio de cultivo apropiado. A continuación, siembre estas células en una placa de pocillos múltiples y agregue la solución de DCFH-DA. Incube la placa durante el tiempo deseado. El DCFH-DA atraviesa la membrana celular. Una vez dentro de la célula, la DCFH-DA se convierte en DCFH en presencia de una enzima esterasa celular. Además, la oxidación de DCFH por especies