Generación de un modelo de ratón PDOX de cáncer colorrectal: estudio de la progresión del cáncer colorrectal en un modelo murino

- Los ganglios linfáticos, o LN, proporcionan un microambiente para el crecimiento tumoral debido a las células estromales presentes en las LN. Las células dendríticas foliculares, o FDC, son los tipos más abundantes de células estromales que liberan quimiocinas, citocinas y factores de crecimiento, que interactúan con las células madre del cáncer colorrectal y aumentan el crecimiento tumoral.

Las FDC también promueven la metástasis extraganglionar del cáncer colorrectal en órganos como los pulmones y el hígado. Para estudiar la progresión del cáncer colorrectal, implantamos células cancerosas derivadas de tumores de pacientes en el órgano, que coinciden con el histotipo tumoral en un modelo de ratón inmunodeprimido conocido como xenoinjerto ortotópico derivado de pacientes o PDOX.

Comience asegurando un ratón anestesiado en posición supina sobre una tabla de disección con cinta de laboratorio. Ahora, mezcle la cantidad necesaria de células de cáncer colorrectal marcadas con luciferasa y FDC en un tubo. Tome la suspensión resultante en una jeringa. A continuación, localice la abertura anal del ratón e inyecte la mezcla de cáncer colorrectal preparada en la capa submucosa del recto.

Para observar la carga metastásica, inyecte luciferina por vía intraperitoneal cada semana y obtenga imágenes del ratón mediante imágenes bioluminiscentes. En presencia de la enzima luciferasa y ATP, la luciferina en las células cancerosas se convierte en oxiluciferina, emitiendo luz azul verdosa. En el siguiente protocolo, generaremos un modelo de ratón de xenoinjerto ortotópico para estudiar la progresión del cáncer colorrectal.

- Para crear un modelo de ratón con CCR, coloque un ratón macho anestesiado de seis a ocho semanas de edad en posición supina bajo un microscopio de disección, asegurando el hocico a un cono de nariz de isoflurano y las extremidades delanteras con cinta adhesiva para mayor estabilidad. Coloque un objeto pequeño, como una pequeña sección de gasa, debajo de la base de la cola, elevando el ano para mejorar la visibilidad y el ángulo. Use pinzas curvas, lubricadas y de punta roma para dilatar el canal anal y exponer la mucosa anal y rectal distal y eliminar las heces.

Conecte una aguja removible estéril de calibre 30 a una jeringa de vidrio de 50 microlitros. Extraiga 10 microlitros de suspensión de células tumorales y HK preparadas en los pasos anteriores en la jeringa. Inyecte los 10 microlitros en la submucosa rectal posterior distal, de 1 a 2 milímetros por encima del canal anal, asegurándose de que no pase a la cavidad pélvica. Finalmente, retire el ratón del cono nasal de isoflurano y obsérvelo durante una hora siguiendo el procedimiento para detectar signos de angustia.