Extracción de miARN circulante: un método para aislar miARN de muestras de plasma mediante extracción orgánica y enriquecimiento de ARN pequeño

- Los microARN o miARN son pequeños ARN no codificantes que regulan la expresión génica degradando el ARNm o bloqueando su traducción en proteínas funcionales. Los miARN circulantes son posibles biomarcadores de cáncer y se pueden extraer de fluidos corporales como el plasma. Para empezar, mezcle el plasma con una solución desnaturalizante que homogeneice simultáneamente la muestra e inhiba las ribonucleasas que degradan el ARN.

Tratar con fenol-cloroformo ácido y centrifugar para separar la muestra en dos fases, una fase orgánica inferior que contiene ADN y proteínas, y una fase acuosa superior que contiene ARN. Recuperar la fase acuosa. Agregue etanol absoluto para precipitar el ARN de la solución.

Lleve la concentración de etanol de la muestra al 25% para establecer una condición inicial propicia para una gran separación de ARN. Transfiera la mezcla a un cartucho de filtro preensamblado y a una centrífuga. Los ARN grandes se inmovilizan selectivamente en el filtro, mientras que los miARN más pequeños se acumulan en el filtrado.

Posteriormente, aumentar la concentración de etanol al 55% para favorecer el aislamiento de miRNA. Transfiera el filtrado a un nuevo cartucho de filtro y