Marcaje de células organoides del CCR: un método para generar células organoides de cáncer colorrectal transducidas por lentivirus GFP

- Los organoides son construcciones celulares tridimensionales in vitro que se autoorganizan para imitar las características clave de los tejidos de su órgano de origen. Para comenzar el etiquetado, trate los organoides cosechados con un cóctel de enzimas proteolíticas y colagenolíticas para disociar las células en suspensión. Centrífuga para separar las células del sobrenadante que contiene enzimas. Deseche el sobrenadante. Disuelva el gránulo de células utilizando un medio que contenga vectores lentivirales. Estos virus recombinantes llevan la secuencia codificante de una proteína verde fluorescente o GFP.

Los virus se fusionan con las células y liberan su material genético y ciertas enzimas virales en el citoplasma. La transcriptasa inversa viral sintetiza el ADN viral complementario que se mueve hacia el núcleo del huésped. La integrasa viral ayuda a incorporar el ADN viral que contiene la secuencia GFP en el genoma del huésped. Cultive estas células transducidas en una matriz extracelular o en una placa de cultivo recubierta de ECM. Aspire el medio y centrifugue para recoger las células no adheridas. Vuelva a suspender las celdas en ECM adicional.

Superponga la suspensión en e