Establecimiento de un modelo experimental de metástasis en ratones: implantación de células organoides que expresan GFP en el modelo PDX para detectar micrometástasis

- Las micrometástasis son un pequeño grupo de células cancerosas que se desprenden de un tumor primario y se diseminan a diferentes partes del cuerpo a través de la sangre o los ganglios linfáticos. Para detectar micrometástasis, suspenda las células organoides del cáncer colorrectal en PBS para mantener el pH y cargue la suspensión celular en una jeringa. A continuación, coloque un ratón anestesiado en posición prona sobre una cama quirúrgica. Haz una pequeña incisión con unas tijeras en la parte inferior del flanco izquierdo y expone el bazo. Tire suavemente del bazo hacia afuera con pinzas e inyecte lentamente la suspensión celular en el bazo. Cierre la incisión con suturas y devuelva al animal a su jaula. Vigílalo hasta que se recupere.

Después del período deseado de inyección, sacrifique el ratón para diseccionar los tumores primarios y los diferentes tejidos. Observe los tejidos disecados bajo un microscopio de fluorescencia. Las células cancerosas que expresan GFP desarrollan un tumor primario en el sitio de la inyección en el bazo. Algunas células cancerosas del tumor primario se trasladan a un órgano diferente, generalmente el hígado, para formar colonias micrometastásicas. En el siguiente protocolo, estableceremos un modelo experimental de metástasis en ratones de células organoides de cáncer colorrectal que expresan GFP.

- Para establecer un modelo experimental de metástasis de xenoinjertos tumorales derivados de pacientes con CCR, se diluyen las suspensiones de células tumorales individuales a una concentración de 4 veces 10 a la cuarta célula por 50 microlitros y se cargan 50 microlitros de células por ratón en una jeringa equipada con una aguja de calibre 22. Coloque el primer ratón NOG anestesiado en posición prona en el banco y haga una pequeña incisión en la región inferior del flanco izquierdo.

Use tijeras y pinzas estériles para cortar cuidadosamente el peritoneo y exponer el bazo, y use las pinzas para agarrar la grasa adherida al bazo. Luego, inyecte lentamente 50 microlitros de la suspensión de células tumorales en el bazo, teniendo cuidado de que no se observen fugas.

Después de que todos los ratones hayan sido inyectados y suturados según sea necesario, regrese a los animales a sus jaulas domésticas y verifique si hay fugas de sutura y viabilidad un día después de la entrega de células tumorales. Utilice calibradores para medir los tumores semanalmente, recolectando los tumores primarios y los tejidos relevantes hasta los puntos finales experimentales apropiados. Transfiera los tumores y órganos disecados a 5 mililitros de PBS helado en una placa de Petri de 10 centímetros sobre hielo y observe los tejidos disecados bajo un microscopio de fluorescencia estereoscópica para evaluar su expresión de GFP.