Infección segmentaria por Adeno-Cre: una técnica para generar cáncer colorrectal aislado utilizando modelos de ratón modificados genéticamente

- Comience tomando un ratón mutante condicional anestesiado con un genoma modificado que porta secuencias específicas de reconocimiento de la enzima Cre-recombinasa llamadas inserciones LoxP que flanquean el gen supresor de tumores que se desea mutar. Exponer quirúrgicamente la cavidad abdominal. Localice el colon distal y pinza su porción superior. Inserte por vía transanal un tubo de grado médico y avance hasta el colon distal. Enjuague el colon con solución salina para eliminar cualquier materia fecal. Reemplace el tubo. Pinza la región inferior del colon para la segmentación. Inflar el segmento utilizando una solución de disociación celular adecuada. Esto perfora la barrera mucosa y aumenta la accesibilidad de las células de la cripta intestinal. Enjuague la solución de disociación.

A continuación, inyecte una suspensión adenoviral en el segmento del colon. Estos vectores virales modificados codifican enzimas Cre-recombinasa. El virus entra en la célula, libera su ADN en el núcleo y expresa las enzimas. Las proteínas reconocen las inserciones de LoxP en el genoma del huésped y catalizan la recombinación específica del sitio, inactivando así el gen supresor de tumores. Esta muta