Ensayo de fosfatasa en células de CCR: un método para examinar el estado de fosforilación de la proteína tau en células de cáncer colorrectal

- La proteína Tau se localiza periféricamente en el nucléolo de las células de cáncer colorrectal y ayuda a mantener la estructura nucleolar. En su mayoría, estas células expresan la proteína tau hiperfosforilada, lo que da lugar a la resistencia a los fármacos. Por lo tanto, analizamos los niveles de fosforilación de tau mediante la realización de un ensayo de fosfatasa.

Comience tomando el lisado celular que contiene la proteína total de las células de cáncer colorrectal humano en dos viales etiquetados como prueba y control. Tratar la muestra de ensayo con la enzima fosfatasa alcalina. La fosfatasa alcalina elimina los grupos fosfato de la proteína tau, mientras que el vial de control retiene la proteína tau fosforilada.

A continuación, pase la muestra y la tau de control en un gel de poliacrilamida para separar las proteínas. La proteína tau fosforilada se mueve más lentamente en el gel que la proteína tau no fosforilada. Electrocsolar la muestra de proteína a una membrana adecuada y añadir anticuerpos primarios correspondientes tanto a la tau fosforilada como a la normal.

Incuba la mancha durante la noche. Trate el blot con un anticuerpo secundario conjugado con enzima reporte