Ensayo de unión a microtúbulos en células de CCR: un método para examinar la proteína tau de unión a microtúbulos en células de cáncer colorrectal

- Tau es una proteína asociada a los microtúbulos que participa en la estabilización y el ensamblaje de los microtúbulos. Muchas células cancerosas expresan la proteína tau hiperfosforilada, que no logra mantener una unión de microtúbulos bien organizada. Para estudiar la interacción entre la proteína tau y los microtúbulos, agregue lisado de células cancerosas que contenga proteína tau y una solución de trabajo de microtúbulos en un tubo de microfuga.

Las proteínas tau no fosforiladas presentes en el lisado celular se unen a los microtúbulos. Ahora, agregue la cantidad deseada de tampón PEM en el tubo para estabilizar la actividad de la tubulina, una proteína que se polimeriza en filamentos para formar microtúbulos. Incuba la mezcla durante el tiempo deseado.

Centrifugar la mezcla para granular la proteína unida a los microtúbulos. La proteína no unida permanece en el sobrenadante. Transfiera el sobrenadante a un tubo nuevo y vuelva a suspender el pellet en un tampón adecuado. Añada un tampón de carga de gel a la suspensión de pellets resuspendida y ejecute las muestras en un gel de poliacrilamida para separar la proteína unida a los microtúbulos y la electrotransferencia en una m