Microdisección láser: una técnica para aislar células invasoras de cáncer colorrectal a partir de un modelo de cultivo organotípico en 3D

- Los modelos organotípicos 3D de cáncer colorrectal son cultivos in vitro diseñados para imitar microambientes tumorales in vivo. El cultivo a menudo contiene células estromalas, como fibroblastos, cocultivadas con células epiteliales de cáncer colorrectal, en un microambiente de matriz extracelular adecuado.

En cultivos establecidos, las células tumorales con potencial metastásico invaden la matriz extracelular. Para aislar estas células invasoras, primero se trata el modelo organotípico con formaldehído para fijar las células y la matriz extracelular. Incubar con alcohol para deshidratar la muestra.

A continuación, incruste en cera de parafina líquida para generar un bloque de tejido. Utilice un ultramicrótomo para obtener secciones en rodajas finas. Monte las secciones en un portaobjetos de vidrio apropiado.

Agregue xileno para desparafinar las secciones. Secuencialmente, incubar las secciones en concentraciones decrecientes de etanol para rehidratar las muestras.

Tratar con Cresyl Violet para teñir y diferenciar las células de cáncer colorrectal del microambiente. Coloque el portaobjetos de vidriera boca abajo sobre la platina del microscopio. Utilizando el software adecuado,