Ensayo de citometría de tracción: un método para cuantificar la fuerza de tracción ejercida por las células cancerosas en la MEC

- Las células generan fuerzas mecánicas que actúan sobre una matriz extracelular. Esta fuerza se denomina fuerza de tracción. Las células ejercen fuerzas de tracción para realizar diversas tareas, como la migración y la proliferación.

Las células cancerosas metastásicas ejercen mayores fuerzas de tracción que las células sanas, por lo tanto, realizamos un ensayo de citometría de tracción para medir las fuerzas de tracción ejercidas por las células sobre sustratos elásticos. Comience sembrando la cantidad deseada de células de cáncer de colon en un hidrogel de poliacrilamida, un gel que imita la MEC in vitro. El gel está compuesto por proteínas de fibronectina, que ayudan a las células a adherirse a la superficie, y perlas fluorescentes, que actúan como marcador de cambios de posición.

Incubar las células durante el período deseado. Las células se adhieren al gel y ejercen la fuerza de tracción, lo que provoca el desplazamiento de las perlas fluorescentes. Ahora, coloque la placa bajo un microscopio fluorescente y tome una imagen de las perlas fluorescentes desplazadas. A continuación, agregue la cantidad deseada de tripsina a la placa para separar las celdas y analizar la fuerza de tracción ejercida por las celdas utilizando el software adecuado. En el siguiente protocolo, realizaremos un ensayo de microscopía de fuerza de tracción para analizar la tracción celular de células de cáncer de colon humano.

- Para realizar el ensayo de microscopía de fuerza de tracción, primero caliente la solución de tripsina-EDTA al 10% SDS al 0,25% a 37 grados centígrados en un baño de agua durante 10 minutos antes de comenzar el experimento de tracción. Retire un gel a la vez de la incubadora de cultivo celular y colóquelo en la platina del microscopio. Después de encontrar una sola celda en el campo de visión, retire la tapa de la placa de Petri y tome una imagen de contraste de fase de la celda.

A continuación, cambie el modo de imagen a fluorescencia y seleccione el filtro adecuado. No mueva la platina del microscopio ni la muestra durante este tiempo. Luego, tome una imagen de las perlas fluorescentes desplazadas por la tracción celular. Ahora, agregue 1 mililitro de solución SDS de tripsina a la placa de Petri para separar la celda del gel. Tome una imagen de referencia de las cuentas después de quitar la celda.