Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:25 min. • April 30th, 2023
- La morfología del sustrato influye en gran medida en el comportamiento y las respuestas metastásicas de las células cancerosas. Una red dinámica de citoesqueleto de actina proporciona soporte estructural a las células y media el movimiento celular. Grandes complejos de proteínas asociados a la membrana, llamados adherencias focales, conectan el citoesqueleto con la matriz extracelular, lo que facilita la propagación celular.
Para comenzar la tinción, tome un cultivo de células cancerosas y trátelas con paraformaldehído para fijar y permeabilizar las células. Ahora, incube las células con un reactivo potenciador de señales que contenga proteínas para preparar las células para reducir la tinción de fondo. Agregue anticuerpos primarios anti-vinculina que se unen a la vinculina, una de las proteínas dentro del complejo de adhesión focal.
A continuación, incube la muestra con un anticuerpo secundario conjugado con colorante fluorescente dirigido al anticuerpo primario. Por último, tratar las células con conjugados de faloidina marcados con fluorescencia que se unen selectivamente a los filamentos de actina del citoesqueleto. Observe las células bajo un microscopio de barrido láser con
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