Modelado de xenoinjertos derivados de pacientes: una técnica para generar modelos de ratón de melanoma

- En los modelos de xenoinjerto o PDX derivados de pacientes, las células tumorales o fragmentos de pacientes humanos se implantan en ratones receptores inmunodeficientes. Los modelos PDX simulan las características biológicas y moleculares del microambiente tumoral humano. Para desarrollar un modelo PDX de melanoma, primero se debe recolectar tejido tumoral de un paciente con melanoma. Extirpar el tejido necrótico del tumor. Picar el tumor para obtener una suspensión. A continuación, prepare un ratón receptor anestesiado en posición prona. Hacer una pequeña incisión quirúrgica en la piel dorsal. Corta suavemente la membrana fascial o la capa de tejido conectivo suelto justo debajo de la piel. Esto separa la piel de las capas musculares subyacentes y ayuda a crear una bolsa para la implantación del tumor.

Transfiera suavemente la suspensión tumoral a la bolsa. Ahora, administre una matriz extracelular artificial en el bolsillo para estabilizar y asegurar las células tumorales implantadas. Grapa quirúrgicamente la herida y deja que el ratón se recupere. Monitoree el ratón receptor semanalmente para observar el crecimiento del tumor de xenoinjerto. En el siguiente protocolo, demostraremos la implantación subcutánea de células tumorales de melanoma derivadas de pacientes en un ratón NSG inmunodeficiente para generar modelos de xenoinjertos derivados de pacientes con melanoma.

- Para implantar tejido de escisión quirúrgica o biopsia quirúrgica, primero afeitar el vello de la parte inferior de la espalda de ratones anestesiados de seis a ocho semanas de edad, dejando un área de aproximadamente 1,5 centímetros a 3 centímetros sin vello. Prepare los trozos de tumor y divida la suspensión tumoral en una placa de Petri en montículos individuales para la implantación quirúrgica. Con una hoja de bisturí, haga una incisión de aproximadamente 5 milímetros de largo en el centro de la parte posterior del ratón. Con un par de pinzas, levante la piel del lado de la incisión opuesto al operador. Con unas tijeras, por otro lado, separa la piel de la capa muscular cortando suavemente la membrana fascial con pequeños cortes de tijera, creando así una bolsa para el tejido tumoral.

Use una hoja de bisturí para recoger un trozo de tumor, así como un montículo individual de tejido de lechada tumoral, y coloque suavemente el tejido en el bolsillo creado. Luego, agregue 100 microlitros de matriz extracelular artificial en el montículo de tejido tumoral en el bolsillo. Con dos pares de pinzas, tire hacia arriba de la incisión en ambos extremos para que los bordes de la herida se acerquen. Luego, aplique una o dos pinzas para cerrar la herida. Por vía subcutánea, inyecte de 1 a 5 miligramos por kilogramo de analgésico. Cuando se complete la cicatrización, después de aproximadamente 7 días, retire los clips de la herida.