Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:02 min. • April 30th, 2023
- En modelos experimentales de ratones con cáncer, el cáncer inducido en el animal se asemeja al cáncer humano en fenotipo. Proporcionan una plataforma eficiente para evaluar la eficacia de posibles terapias. Para inducir un modelo de carcinogénesis cutánea en dos pasos, primero se prepara a un ratón anestesiado inmunodeprimido en posición prona. Afeita su pelaje para exponer la piel subyacente. En el primer paso, aplique un potente agente iniciador de tumores en la piel dorsal expuesta.
Esos folículos pilosos en su fase de reposo o telógena, albergan glándulas sebáceas inactivas. La falta de flujo de sebo resultante permite la acumulación del compuesto dentro de estos folículos pilosos. El compuesto se difunde en las células circundantes e induce la mutación de genes objetivo, principalmente en las células madre del folículo piloso o en las células madre de los queratinocitos primarios. La expresión génica alterada provoca la iniciación tumoral en estas células.
En el segundo paso, aplique un agente promotor del crecimiento tumoral adecuado en la piel dorsal repetidamente durante los intervalos de tiempo deseados. El producto químico estimula la expansión de la población celular iniciada. La proliferación celular continua conduce a la formación de excrecencias cancerígenas llamadas papilomas.
En el siguiente protocolo, mostramos la generación de un modelo de ratón de carcinogénesis cutánea en dos etapas utilizando los productos químicos DMBA, un mutágeno, y TPA, un agente promotor del crecimiento.
- Antes de comenzar el experimento, coloque a los ratones agresivos de 7 a 9 semanas de edad en jaulas separadas para evitar peleas y lesiones en la piel. Para la inducción del papiloma cutáneo, primero afeitar la piel posterior de los animales de experimentación y pesar a los ratones individualmente. Cuarenta y ocho horas después del afeitado, use una pipeta para aplicar 50 microgramos de DMBA en 200 microlitros de acetona en el área afeitada de cada ratón anestesiado.
Para la promoción del papiloma cutáneo, siete días después de la aplicación de DMBA, trate la piel con 5 microgramos de TPA en 200 microlitros de acetona, dos veces por semana hasta el final del experimento. Examine a los animales en busca de papilomas y fotografíe y registre el tamaño de cada papiloma individual en un mapa, cada semana.
Una masa palpable de más de 1 milímetro de diámetro se considera papiloma si permanece más de una semana.