Preparación del virión del poliomavirus recombinante de células de Merkel (MCPyV): una técnica para producir un virión MCPyV recombinante de alto título

- El poliomavirus de células de Merkel, o MCPyV, es un oncovirus de ADN bicatenario con un genoma circular que causa carcinoma de células de Merkel, un tipo de cáncer de piel. Para preparar los viriones de MCPyV, primero se debe tratar un cultivo adherente de células de empaquetamiento con un cóctel que contiene un agente de transfección, el genoma viral, y dos plásmidos de expresión que codifican proteínas necesarias para promover la replicación viral.

Durante la incubación, el reactivo de transfección forma lypoplexes con los plásmidos, lo que facilita su entrega a las celdas de empaquetamiento. Una vez dentro del núcleo, la maquinaria celular permite la expresión de los genomas viral y plásmido. Los plásmidos de expresión codifican proteínas de antígeno de tumor grande y antígeno de tumor pequeño. Estas proteínas se translocan al núcleo e impulsan la replicación del ADN viral. Posteriormente, el genoma viral codifica proteínas estructurales de la cápside. Estas proteínas se mueven hacia el núcleo y ayudan en el ensamblaje de viriones recombinantes.

A continuación, coseche las células cultivadas. Trátelos con una solución que contenga detergente y DNasa. El detergente lisa las cé