Modificación genética de queratinocitos humanos primarios: un método para manipular genéticamente los queratinocitos utilizando retrovirus recombinantes

- Los queratinocitos son el tipo de célula prominente presente en la epidermis o la capa más externa de la piel. Para modificar genéticamente los queratinocitos, se debe comenzar con un cultivo de células fénix de empaquetamiento retroviral. Posteriormente, se añade una mezcla que contenga vectores retrovirales portadores del gen de interés y un reactivo de transfección. Incube la placa durante el tiempo deseado.

El reactivo de transfección facilita la entrega de material genético viral a las células de empaquetamiento. Estas células específicamente diseñadas codifican proteínas necesarias para la producción de cápside retroviral y promueven el empaquetamiento del ARN del vector retroviral que lleva el gen de interés. Al empaquetarse, los virus maduros salen de las células hacia el medio. Ahora, transfiera los medios suspendidos por el virus a una placa de cultivo fresca que contenga queratinocitos primarios. Aumente el cultivo con una solución de polímero catiónico deseada.

El polímero catiónico neutraliza las cargas negativas en las membranas virales y de queratinocitos, aumentando la eficiencia de la fusión viral con la superficie celular. Tras la fusión, el virus libera su ARN