Ensayo de dosis mínima eritematosa: un método para medir la sensibilidad a los rayos UV en modelos de ratón

- Los melanocitos producen un pigmento oscuro llamado eumelanina que absorbe las radiaciones UV dañinas, protegiendo la piel. Para medir la sensibilidad a los rayos UV, comience tomando un modelo de ratón anestesiado. Prepara al ratón quitándole el pelaje dorsal para exponer la capa epidérmica. Fije un trozo de cinta adhesiva que bloquee los rayos UV con un número determinado de orificios en la piel expuesta. Fije pequeñas cintas desmontables sobre todos los agujeros, excepto uno, para enmascarar la abertura.

Ahora, someta el mouse a la radiación UV durante el tiempo deseado. Durante el período de exposición, desenmascare los agujeros restantes secuencialmente en puntos de tiempo predeterminados. Esto facilita que las manchas cutáneas expuestas sucesivamente reciban dosis decrecientes de radiación UV. Los orificios permiten la penetración localizada de los rayos UV en la epidermis del ratón.

Tras la exposición, las células epidérmicas liberan moléculas proinflamatorias. Estas moléculas se difunden hacia la dermis y dilatan los vasos sanguíneos dérmicos causando eritema o enrojecimiento de la piel. Posteriormente, los leucocitos se infiltran en la dermis y provocan edema o hinchazón en la zona expuesta.

En el criterio de valoración experimental, detenga la radiación y retire la cinta para observar el eritema y el edema. En el siguiente protocolo, mediremos la sensibilidad a los rayos UV en un modelo de ratón humanizado tratado con forskolina, un fármaco productor de melanina, mediante la determinación de la Dosis Eritematosa Mínima.

- Para determinar la Dosis Eritematosa Mínima, o MED, cada animal será expuesto a una variedad de dosis UV. Comience preparando un trozo de cinta adhesiva oclusiva UV, utilizando una perforadora de alta resistencia con un recorte circular de 1 centímetro cuadrado para perforar agujeros en la cinta. Sobre cada agujero de la cinta, aplique un trozo de cinta pequeño pero fácilmente desmontable que se pueda quitar para la exposición a los rayos UV. Coloque la cinta en la superficie dorsal del ratón anestesiado.

Si los ojos del animal están abiertos, aplique lágrimas artificiales para evitar lesiones por el secado y la exposición a los rayos UV. Encienda la fuente UV que consta de dos lámparas UVB con una salida máxima de 313 nanómetros y un rango de 280 a 370 nanómetros. Permita que la lámpara se equilibre a una salida UV constante antes de usar un fotómetro UV con el sensor UVB para verificar la salida.

En función de la tasa de transmisión UV medida por el fotómetro UV, calcule el tiempo de exposición UV para cada dosis deseada. Por ejemplo, la salida de UVB de su lámpara mide 2,4 milivatios por centímetro cuadrado. Por lo tanto, para administrar 5 kilojulios por metro cuadrado, la piel tendría que estar expuesta a 208 segundos de radiación UVB según lo calculado aquí.

A continuación, coloque la superficie ventral del animal sedado hacia abajo para garantizar una exposición uniforme a los rayos UV. Para administrar la dosis de radiación elegida, retire secuencialmente los pequeños trozos de cinta adhesiva que cubren los orificios en el momento adecuado.

Por ejemplo, si 40 kilojulios por metro cuadrado es la dosis más grande, el ratón estaría bajo la lámpara durante 27 minutos y 47 segundos y el agujero para esta dosis estaría expuesto desde el principio. Sin embargo, para la condición de 5 kilojulios por metro cuadrado, la cinta se retiraría con 208 segundos de tiempo de exposición restantes. Después de la exposición a los rayos UV, retire con cuidado la cinta y coloque a los animales en un lugar cálido y tranquilo para recuperarse de la anestesia antes de devolverlos a sus jaulas.

El valor de la Dosis Eritematosa Mínima, o MED, corresponde a la dosis mínima de UV que causa inflamación definida por eritema y/o edema de todo el círculo de piel expuesto. Monitoree el ratón durante 24 a 48 horas para buscar áreas discretas de eritema o edema en las áreas expuestas a los rayos UV.

A veces, los rastrojos de pelo residuales confunden la interpretación de la prueba MED al enmascarar el eritema o el edema cutáneo subyacente. Humedecer la piel con etanol al 70% hace que la piel sea mucho más interpretable. Documente fotográficamente cualquier hallazgo en la piel y luego devuelva los ratones al animalario.