Name: La identificación de genes inducida por la desregulación de Sarcoma de Kaposi asociado al virus del herpes (HVSK) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-14T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Aprende la técnica de doble marcaje por inmunohistoquímica en tejido tumoral de sarcoma de Kaposi para identificar proteínas virales y celulares. Este método permite localizar agentes infecciosos y genes celulares desregulados en la misma muestra.

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Damos las gracias a James EK Hildreth, Meharry Medical College, por su asesoramiento y revisión de este manuscrito. También queremos agradecer a Diana Marver para la edición del manuscrito. Este trabajo fue apoyado por el Centro de Meharry Vanderbilt para la Investigación del SIDA (NIH P30 AI054999-05), el Centro de Salud SIDA disparidades de Investigación, NIH RR019192 5U54-05, el Centro de Meharry de Investigación Clínica, de Subvenciones del NIH P20RR011792, y por el NIH conceder P01 CA113239. DJA fue parcialmente financiado por las subvenciones piloto del Centro Vanderbilt-Meharry for AIDS Research (CFAR) y el Centro para la Investigación Clínica Meharry (CRC).

<ol><li>Sitas, F., Newton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma+in+South+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst+Monogr%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma in South Africa.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. 28, 1-4 (2001).</li>
<li>Moore, P. S., Chang, Y. Kaposi's sarcoma associated herpesvirus. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMoore%2C+PS+%22Field%27s+Virology%22">Field's Virology</a>. Knipe, D. M., Howley, P. M. , Lippincott Williams and Wilkins. Philadelphia, PA. 2803-2833 (2002).</li>
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<li>Cesarman, E., Chang, Y., Moore, P., Said, J. W., Knowles, D. M., M, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-related+body-cavity-based+lymphomas%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-related body-cavity-based lymphomas.</a> N Engl J Med. 18, 1186-1191 (1995).</li>
<li>Cesarman, E., Knowles, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus%3A+a+lymphotropic+human+herpesvirus+associated+with+Kaposi%27s+sarcoma%2C+primary+effusion+lymphoma%2C+and+multicentric+Castleman%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Diagn+Pathol%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: a lymphotropic human herpesvirus associated with Kaposi's sarcoma, primary effusion lymphoma, and multicentric Castleman's disease.</a> Semin Diagn Pathol. 14, 54-66 (1997).</li>
<li>Chiou, C. J., Poole, L. J., Kim, P. S., Ciufo, D. M., Cannon, J. S., ap Rhys, C. M., Alcendor, D. J., Zong, J. C., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+gene+expression+and+a+transactivation+function+exhibited+by+the+vGCR+%28ORF74%29+chemokine+receptor+protein+of+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Patterns of gene expression and a transactivation function exhibited by the vGCR (ORF74) chemokine receptor protein of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.</a> J Virol. 76, 3421-3439 (2002).</li>
<li>Staskus, K. A., Zhong, W., Gebhard, K., Herndier, B., Wang, H., Renne, R., Beneke, J., Pudney, J., Anderson, D. J., Ganem, D., Haase, A. T., T, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+gene+expression+in+endothelial+%28spindle%29+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus gene expression in endothelial (spindle) tumor cells.</a> J Virol. 71, 715-719 (1997).</li>
<li>Alcendor, D. J., Zhu, W. Q., Desai, P., Vigil, H. E., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KSHV+downregulation+of+galectin-3+in+kaposi%27s+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">KSHV downregulation of galectin-3 in kaposi's sarcoma.</a> Glycobiology. , (2009).</li>
<li>Ciufo, D. M., Cannon, J. S., Poole, L. J., Wu, F. Y., Murray, P., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spindle+cell+conversion+by+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus%3A+formation+of+colonies+and+plaques+with+mixed+lytic+and+latent+gene+expression+in+infected+primary+dermal+microvascular+endothelial+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Spindle cell conversion by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: formation of colonies and plaques with mixed lytic and latent gene expression in infected primary dermal microvascular endothelial cell cultures.</a> J Virol. 75, 5614-5626 (2001).</li>
<li>Long, E., Ilie, M., Hofman, V., Havet, K., Selva, E., Butori, C., Lacour, J. P., Nelson, A. M., Cathomas, G., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LANA-1%2C+Bcl-2%2C+Mcl-1+and+HIF-1alpha+protein+expression+in+HIV-associated+Kaposi+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch%22%5BJournal%5D)">LANA-1, Bcl-2, Mcl-1 and HIF-1alpha protein expression in HIV-associated Kaposi sarcoma.</a> Virchows Arch. 2, 159-170 (2009).</li>
</ol>

Las metodologías utilizadas en este informe se puede realizar en una variedad de entornos de laboratorio. Que requieren algún equipo especial o acceso a instalaciones básicas. Las debidas precauciones se deben tomar al hacer experimentos con virus patógenos infecciosos como HVSK que puede requerir el uso de un nivel biosaftey 3 (BSL-3) instalaciones. Adquisiciones de los tejidos también debe ser aprobado por las juntas de revisión institucional adecuado (IRB). Estas metodologías en conjunto ...

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640</td><td>Invitrogen</td><td>05-0001DJ</td><td></td></tr><tr><td>TPA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1585</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7,4</td><td>Invitrogen</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Butirato de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>19364 (FLUKA)</td><td></td></tr><tr><td>Medio EBM-2</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-3156</td><td>+ suplemento de kits de balas</td></tr><tr><td>Células DMVEC (HMVEC)</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC2543</td><td></td></tr><tr><td>Suero de ternero fetal</td><td>Hyclone</td><td>SH30066.03</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina/estreptomicina</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Placas con cámaras</td><td>Nalge Nunc international</td><td>154461</td><td></td></tr><tr><td>Ac. m. LANA del VHSK</td><td>Vector Laboratories</td><td>VP-H913</td><td>dilución 1:50/IFA</td></tr><tr><td>Ac. p. caprino contra galectina-3</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>AF1154</td><td></td></tr><tr><td>Asno anti-cabra FITC</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>705-095-1</td><td></td></tr><tr><td>Asno anti-cabra Rho</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>705-295-003</td><td>dilución 1:100/IFA</td></tr><tr><td>Medio de montaje</td><td>Vector Laboratories</td><td>H 1500</td><td>Vectashield con DAPI</td></tr><tr><td>Kit de ensayo de proteína BCA</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>23235</td><td></td></tr><tr><td>Nitrocelulosa</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0112</td><td></td></tr><tr><td>Conj. asno anti-cabra</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>SC 2020</td><td></td></tr><tr><td>Sustrato para Western</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>34075</td><td></td></tr><tr><td>Biotina-conejo anti cabra</td><td>Dako</td><td>305-065-045</td><td></td></tr><tr><td>Conj. AP-estreptavidina</td><td>Dako</td><td>K 0492 (kit)</td><td></td></tr><tr><td>Conjunto RNasa sin DNasa</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td></td></tr><tr><td>Ciclador MJ Mini</td><td>Bio-Rad</td><td>PTC-1148C</td><td></td></tr><tr><td>Biofotómetro</td><td>Eppendorf</td><td>952000006</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga RC 6 Plus</td><td>Sorvall, Thermo Scientific</td><td>46910</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrífuga Coulter Optima L-90K</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>392052</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de detección de PCR en tiempo real MYiQ iCycler</td><td>Bio-Rad</td><td>170-9770</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente TE 2000S</td><td>Nikon Instruments</td><td>TE2000S</td><td></td></tr><tr><td>2100 Bioanalizador</td><td>Agilent Technologies</td><td>G2938C</td><td></td></tr><tr><td>Eclipse E 200</td><td>Nikon Instruments</td><td>E 200</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga Sorvall Legend RT</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>75004377</td><td></td></tr></tbody></table>

la identificación de genes inducida por la desregulación de sarcoma de kaposi asociado al virus del herpes (hvsk)

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

Actualmente KS es el más predominante del VIH / SIDA relacionados con tumores malignos en el sur de África y de ahí el mundo. 1,2 Se caracteriza por ser un tumor angioproliferative de las células endoteliales vasculares y produce enfermedades raras células B linfoproliferativos en forma de linfomas derrame pleural (PEL) y algunas formas de enfermedad de Castleman multicéntrica. 5.3 Sólo 1.5% de las células KS lesiones apoyar activamente la replicación lítica del sarcoma de Kaposi asociado al virus del herpes (HVSK), el agente etiológico asociado con sarcoma de Kaposi, y está claro que los factores celulares que interactuar con factores virales en el proceso de oncogénesis y la progresión del tumor 6,7. Identificación de la novela factor del huésped determinantes que contribuyen a la patología de KS es esencial para el desarrollo de marcadores de pronóstico para la progresión tumoral y la metástasis, así como para el desarrollo de nuevas terapias para el tratamiento del sarcoma de Kaposi 8. Los detalles del vídeo que acompaña a los métodos que utilizamos para identificar a la célula huésped programas de expresión de genes alterados en las células endoteliales microvasculares dérmicas (DMVEC) después de la infección HVSK y en el tejido tumoral KS. 9 Una vez que los genes desregulados son identificados por análisis de microarrays, los cambios en la expresión de la proteína se confirmada por inmunoblot y la inmunofluorescencia doble etiquetado. Cambios en la expresión transcripcional de genes desregulados se confirmó in vitro por cuantitativa en tiempo real de reacción en cadena de la polimerasa (QRT-PCR). La validación de los resultados in vitro usando tejidos de archivo tumor KS también se realiza por inmunohistoquímica doble etiquetado y de microarrays de tejidos 8,10. Nuestro enfoque para identificar los genes que están alteradas en el microambiente del tejido del tumor KS permitirá el desarrollo de la in vitro y, posteriormente, en los sistemas modelo in vivo para descubrimiento y evaluación de nuevos terapéuticos potenciales para el tratamiento del sarcoma de Kaposi.

Factores de la célula huésped juegan un papel crítico en el establecimiento y mantenimiento de sarcoma de Kaposi (SK). Resumimos los métodos para identificar los factores de la célula huésped alterada en las células infectadas por HVSK DMVEC, y en el tejido tumoral KS. Genes celulares alteradas por el virus servirá como posible objetivo (s) de nuevas terapias.

La identificación de genes inducida por la desregulación de Sarcoma de Kaposi asociado al virus del herpes (HVSK)

Actualmente, el SK es la neoplasia maligna relacionada con el VIH/SIDA más predominante en el sur de África y, por lo tanto, en el mundo.1,2 Se caracteriza como un proceso angioproliferativo...

El objetivo general de este procedimiento es demostrar la doble marcación del tejido tumoral del sarcoma de Kaposi mediante inmunohistoquímica para proteínas virales y de la célula huésped. Esto se logra primero exponiendo los antígenos mediante calor. El segundo paso del procedimiento consiste en la aplicación del anticuerpo primario conjugado con biotina.El tercer paso del procedimiento consiste en la adición del conjugado enzimático strep din. El paso final del procedimiento es la adición del sustrato enzimático al tejido para el desarrollo del color. En última instancia, se pueden obtener resultados que muestran la localización de las proteínas virales y de las células huésped en el tejido tumoral mediante tinción inmunohistoquímica.Este método puede responder preguntas clave en el campo de la patología, como la identificación de agentes infecciosos así como de genes celulares desregulados en la misma muestra. Bajo una campana extractora, coloque hasta ocho portaobjetos ChemEight con secciones de cinco micrómetros de tejido fijado incluido en parafina en un frasco Coplin con xilol. Incube durante 10 minutos para desparafinar y preparar los portaobjetos para inmunohistoquímica doble marcación.Rehidrate el tejido en una serie graduada de soluciones de etanol al 100 %, 95 % y 70 % durante cinco minutos cada una. Transfiera los portaobjetos al agua durante al menos 10 minutos antes de la exposición del antígeno, también conocida como recuperación del antígeno para la exposición del antígeno. Sumerja los portaobjetos en un recipiente de plástico que contenga una solución recién preparada a 95 grados Celsius.Caliente el tampón citrato 50 milimolar en un horno de microondas para mantener la ebullición a 95 grados Celsius durante 15 minutos. Transfiera inmediatamente los portaobjetos a un frasco coplanar lleno de agua destilada a temperatura ambiente. Transfiera los portaobjetos a un frasco coplan limpio lleno con solución de bloqueo recién preparada.Incubar a temperatura ambiente durante 30 minutos para inhibir la peroxidasa endógena. Lavar tres veces con 1X PBS a temperatura ambiente durante cinco minutos por cada lavado. Retirar los portaobjetos del lavado con PBS y eliminar el exceso; cubrir el tejido con 200 microlitros de solución bloqueadora fría en hielo y tapar con una tira de parafina para evitar el secado.Coloque los portaobjetos en una cámara humidificada e incube a temperatura ambiente durante una hora. Retire la tira de parafina y agite para eliminar el exceso de solución bloqueante, agregando entre 50 y 100 microlitros de anticuerpo primario frío contra KSHV Lana, diluido en tampón bloqueante, para cubrir el tejido. Cubra nuevamente el tejido con una tira fresca de parafina e incube en la cámara humidificada durante una a dos horas.Lave las laminillas tres veces en PBS 1X durante cinco minutos. En cada lavado, agregue de 50 a 100 microlitros de anticuerpo secundario biotinilado diluido en PBS 1X e incube en la cámara humidificada a temperatura ambiente durante 30 a 45 minutos. Mientras las laminillas están en incubación, prepare la estreptavidina conjugada con peroxidasa.Utilizando el kit de animación dueto daco, agregue 10 microlitros de la solución A a un mililitro de un XPBS en un tubo einor de 1,5 mililitros y vortexee para mezclar. Agregue 10 microlitros de la solución B y vortexee nuevamente; incube a temperatura ambiente durante 30 minutos. Lave los portaobjetos en un XPBS tres veces, cinco minutos cada lavado.Agregue nuevamente entre 100 y 200 microlitros de estreptavidina conjugada con peroxidasa de rábano picante a las laminillas. Incube a temperatura ambiente en una cámara humedecida durante 30 a 45 minutos. Nuevamente, lave las laminillas tres veces en un XPBS durante cinco minutos por cada lavado.Cinco minutos antes de finalizar el lavado, coloque una tableta de DAB en un tubo cónico de 50 mililitros que contenga 20 mililitros de PBS 1X y 25 microlitros de peróxido de hidrógeno al 3%. Filtre la solución de DAB a través de un filtro de jeringa de 0,45 micrómetros, trabajando con un portaobjetos a la vez. Cubra el tejido con un mililitro de solución de DAB bajo iluminación de campo claro en un microscopio de luz.Observe el desarrollo del color para LANA del VHSK en células infectadas hasta que se alcance el desarrollo de color deseado. Sumerja los portaobjetos en agua destilada durante cinco minutos para detener la reacción en la doble marcación. Repita el proceso comenzando con la exposición del antígeno en tampón citrato a 95 grados Celsius, tal como se describe en el texto adjunto, y tiña.Utilizando el mismo procedimiento, monte el tejido con medio de montaje tipo Permount y cúbralo con un cubreobjetos. Imagen bajo iluminación de campo brillante. A menudo es conveniente enviar muchos especímenes individuales embebidos en bloques de parafina para que sean perforados y organizados en una matriz de microarreglos de tejidos, a fin de realizar análisis estadísticos adicionales aquí. Las células marrones positivas para la proteína celular PCAM-1 (CD31), indicadas con una flecha gris, se agrupan alrededor de los vasos sanguíneos.Células rojas positivas para la proteína viral. Las células Lana marcadas con flechas negras indican células infectadas con el virus del herpes asociado al sarcoma de Kaposi. Aquí se muestra una ampliación de menor potencia de células marrones positivas para la proteína celular pcam.Un CD31 indicado con flechas grises en una región alrededor de los vasos sanguíneos. Células rojas positivas para la proteína viral. Lana marcada con una flecha negra indica células infectadas con el virus del herpes asociado al sarcoma de Kaposi.Aquí se muestra una biopsia de tejido tumoral de sarcoma de Kaposi en una matriz microperforada de tejido tumoral, con células marrones positivas para la proteína viral. Lana indica células infectadas con el virus del herpes asociado al sarcoma de Kaposi y que muestran cierta formación de células fusiformes. Aquí hay otra biopsia de tejido tumoral de sarcoma de Kaposi en una matriz microperforada de tejido tumoral, con células marrones positivas para la proteína viral.Lana indica células infectadas con el virus del herpes asociado al sarcoma de Kaposi con un alto grado de formación de células fusiformes. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar inmunohistoquímica con doble marcado en tejido fijado en formalina e incluido en parafina. Durante la realización de este experimento, es muy importante observar el desarrollo del color bajo el microscopio e interrumpir la reacción con agua.

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Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Se describe un protocolo para identificar las principales funciones de las moléculas de señalización de acogida en la replicación lítica de un modelo herpesvirus, virus herpes gamma 68 (γHV68). La utilización de cepas de ratón modificados genéticamente y los fibroblastos embrionarios de γHV68 replicación lítica, el protocolo permite tanto la caracterización fenotípica y molecular de las interacciones interrogatorio virus-huésped durante la replicación viral lítico.

Disección de Host-virus Interacción en la replicación lítica de un Herpesvirus Modelo

Un método de observación de moléculas individuales de ADN en células vivas se describe. La técnica se basa en la unión de una proteína marcada con fluorescencia represor lac a sitios de unión ingeniería genética en el ADN de interés. Este método puede ser adaptado para seguir muchos ADNs recombinantes en células vivas en el tiempo.

Supervisión de la replicación del plásmido en células de mamíferos en vivo durante varias generaciones por microscopía de fluorescencia

Retrovirus endógenos humanos (HERV), que ocupan 8% del genoma humano, conservan la capacidad de codificación de los escasos pero cien mil repeticiones terminales largas (LTRs). A Affymetrix microarray costumbre fue diseñado para identificar la expresión locus HERV individual y se utilizó en los tejidos de cáncer de próstata como una prueba de concepto para futuros estudios clínicos.

La identificación basada en microarrays de expresión individual HERV Loci: Aplicación al descubrimiento de biomarcadores en el cáncer de próstata

Se describe un protocolo para medir la producción de citoquinas antivirales en ratones infectados con un virus herpes modelo, murino herpesvirus gamma 68 (γ HV68) que está relacionado con estrechamente a sarcoma de herpesvirus asociado de Kaposi humano (VHSK) y virus de Epstein-Barr (EBV). La utilización de cepas de ratones genéticamente modificados y los fibroblastos de embriones de ratón (MEFs), se evaluó la producción de citocina antiviral tanto in vivo como ex vivo. "Reconstituir" la...

La disección de señalización inmune innata en Evasion Viral de la producción de citoquinas

Hemos establecido un fluorescente en el protocolo de hibridación in situ para la detección de un genoma del virus de ADN persistente dentro de las secciones de tejido de modelos animales. Este protocolo permite el estudio de proceso de infección por codetection del genoma viral, sus productos de ARN, y proteínas virales o celulares dentro de las células individuales.

Detección del genoma y transcripciones de un virus ADN persistente en los tejidos neuronales por Fluorescente In situ La hibridación Combinado con inmunotinción

Sarcoma de Kaposi (KS) es un tumor inducido por infección con el virus oncogénico herpesvirus-8/KS el herpesvirus humano (HHV-8/KSHV). El modelo de cultura de célula endotelial descrito aquí está especialmente preparado para el estudio de los mecanismos por los cuales KSHV transforma las células del huésped.

Un modelo In Vitro para el estudio de transformación celular por Herpesvirus del Sarcoma de Kaposi

Fábricas transcripcionales virales son estructuras discretas que se enriquecen con celular polimerasa de ARN II para aumentar la transcripción de genes virales durante la reactivación. Aquí, se describe un método para localizar sitios de transcripción activamente de cromatina viral en el espacio 3D nuclear por una combinación de la hibridación de RNA en situ y tinción de inmunofluorescencia.

Proyección de imagen funcional de fábricas de transcripción Viral mediante microscopia de fluorescencia 3D

Aquí se describe un protocolo para el empleo de proyección de ARNi de alto rendimiento para descubrir destinos host que se pueden manipular para mejorar la terapia de virus oncolíticos, específicamente rhabodvirus y vaccinia virus terapia, pero puede adaptarse fácilmente a otros oncolíticos plataformas de virus o para descubrir genes de host que modulan generalmente replicación del virus.

Detección del genoma-ancha de RNAi para identificar los Host factores que modulan la terapia de Virus oncolíticos

Describimos un protocolo que utiliza la hibridación in situ por fluorescencia (FISH) para visualizar múltiples ARN herpesvirales dentro de células humanas infectadas lyéticamente, ya sea en suspensión o adherente. Este protocolo incluye la cuantificación de la fluorescencia produciendo una relación nucleocitotoplasmática y se puede extender para la visualización simultánea de proteínas huésped y virales con inmunofluorescencia (IF).

Fluorescencia cuantitativa en hibridación situ (FISH) e inmunofluorescencia (IF) de productos genéticos específicos en células infectadas por KSHV

Este protocolo describe un sistema in vitro para modelar la infección lítica de novo del herpesvirus asociado al sarcoma de Kaposi utilizando viriones derivados de BAC16. El método permite la investigación de la replicación y diseminación viral temprana. La producción de virus infecciosos se cuantifica mediante ensayos de unidades infecciosas basadas en GFP y PCR en tiempo real de genomas virales encapsulados.

Establecimiento y cuantificación de la infección lítica de novo por herpesvirus asociado al sarcoma de Kaposi libre

Aprende la técnica de doble marcaje por inmunohistoquímica en tejido tumoral de sarcoma de Kaposi para identificar proteínas virales y celulares. Este método permite localizar agentes infecciosos y genes celulares desregulados en la misma muestra.

La identificación de genes inducida por la desregulación de Sarcoma de Kaposi asociado al virus del herpes (HVSK)

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