Ensayo reportero basado en ELISA para estudiar la interacción receptor-ligando en células BW

Para estudiar las interacciones receptor-ligando, comience con una placa de múltiples pocillos que contenga medios con células diana que expresen ligandos de prueba en su superficie.

Agregue células BW de ratón modificadas, una nueva población de células B que expresan receptores quiméricos unidos a la membrana. Los receptores quiméricos comprenden el dominio extracelular de un receptor específico fusionado con el dominio de señalización transmembrana e intracelular del receptor de células B.

Los ligandos en las células diana interactúan con el dominio extracelular de los receptores quiméricos de las células BW, lo que provoca la activación del dominio de señalización intracelular en las células BW. Esto desencadena la señalización posterior y la producción de citoquinas, moléculas indicadoras secretoras que se liberan fuera de las células BW y aparecen en los medios.

Centrifugar la placa. Transfiera el sobrenadante que contiene citoquinas a una placa ELISA previamente recubierta con anticuerpos anticitoquinas. Las citocinas interactúan con las regiones Fab de los anticuerpos, lo que lleva a su inmovilización en la superficie de la placa.

Trate la placa con una solución de bloqueo