Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:03 min. • August 20th, 2025
Tome una rata previamente inmunizada con una emulsión adyuvante de antígeno que contenga autoantígenos derivados de la glándula lagrimal y antígenos extraños.
Vuelva a inyectar la emulsión e inyecte por vía intraperitoneal la toxina de la tos ferina, asegurando la máxima activación de las células T.
Las células activadas se diferencian en células T de memoria efectoras circulantes, TEM y células T de memoria residentes en tejido, TRM. Un porcentaje de TRM reside en los tejidos de la superficie ocular.
Después de un intervalo definido, inyecte los antígenos en la subconjuntiva fornical y las glándulas lagrimales, induciendo inflamación localizada.
Las células presentadoras de antígenos subconjuntivales, APC, presentan antígenos a las TRM, lo que desencadena la liberación de citocinas.
Las citocinas inducen a las células epiteliales conjuntivales a liberar quimiocinas, que reclutan TEM.
Las APC reactivan los TEM infiltrados, desencadenando la liberación de citoquinas proinflamatorias.
Las citocinas causan la muerte de las células caliciformes conjuntivales productoras de mucina, disminuyendo los niveles de mucina y causando inestabilidad de la película lagrimal.
Las citocinas inducen la muerte de las células de la glándula lagrimal, lo que reduce la producción de lágrimas, y estimulan las células epiteliales de la córnea para producir metaloproteinasas de matriz, dañando la córnea.
Evalúe a la rata para detectar las características clínicas que indican una inducción exitosa del ojo seco.
El día cero, distribuya 200 microlitros de la emulsión que contiene 1 miligramo de extracto de glándula lagrimal y 200 microgramos de ovoalbúmina, y complete el adyuvante de Freund en jeringas Luer-lock de 1 mililitro y equipe las jeringas con agujas de calibre 27.
Sin usar anestesia, inyecte la emulsión por vía subcutánea en la base de las colas de rata. Luego, el día 14 de manera similar, inyecte 200 microlitros del mismo antígeno y adyuvante de Freund incompleto. El mismo día, inyecte por vía intraperitoneal 300 nanogramos de toxina de la tos ferina en 100 microlitros de PBS.
El día 48, pese la cantidad requerida de ovoalbúmina y disuélvala en PBS, luego, combine la ovoalbúmina con el extracto de glándula lagrimal descongelado preparado anteriormente en este video, haciendo una solución de antígeno que contiene 1 miligramo por mililitro de ovoalbúmina y 1 miligramo por mililitro de extracto de glándula lagrimal.
Después de anestesiar a las ratas, inyecte 5 microlitros de antígeno en la subconjuntiva fornicial del ojo, luego, inyecte 20 microlitros de antígeno en la glándula lagrimal.