Name: Preparación de inmunógeno ratón hipófisis para la inducción de la hipofisitis autoinmune experimental (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Aprende a preparar proteínas de hipófisis de ratón para estudiar la hipofisitis autoinmune mediante homogeneización y centrifugación. Este protocolo permite investigar los mecanismos de la enfermedad.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue apoyado por el NIH subvención DK080351 para PC.

Protocolo experimental El primer paso de este protocolo experimental es recoger un gran número de glándulas pituitarias de ratón. El segundo paso consiste en homogeneizar las glándulas para preparar un extracto de proteínas. El tercer paso es para emulsionar estas proteínas con una mezcla de hidrocarburos. Paso 1: Recolección y almacenamiento de ratón glándulas pituitarias La glándula pituitaria del ratón se encuentra en la base del cráneo en una depresión del hueso esfenoides llamada silla turca, rodeada lateralmente por los nervios trigémino y anteriormente por el quiasma óptico. La glándula está compuesta de un lóbulo anterior más grande y más pequeño lóbulo posterior y medio, y pesa un promedio de 1,9 mg. La glándula pituitaria son recogidos de los ratones de cepas mixta, sexos, edades, y destinado a ser sacrificado por el centro de atención animal. Para aislar la glándula pituitaria, el ratón es la eutanasia, la piel sobre el cráneo disecado, y el hueso del cráneo a cielo abierto con unas tijeras. El cerebro se levanta para exponer la glándula pituitaria, la cual es entonces aislado de los alrededores de la duramadre, recogió del hueso esfenoides y se almacena en un tubo de plástico con hielo seco. En general, se utilizan 300 glándulas pituitaria del ratón para la preparación de una proteína, un número que puede ser recogido por una persona en 9 horas. Una vez que la colección se completa, el tubo que contiene las glándulas pituitarias se almacenan a -80 ° C hasta que esté listo para el siguiente paso. Paso 2. La extracción de las proteínas del ratón pituitaria <ol><li> Añadir el tampón de homogeneización a un tubo Falcon de 15 ml (catálogo no 352.059), mantenidos en un baño de hielo, con 250 l de tampón por cada 100 glándulas pituitarias recogidos. Utilice un tampón de fuerza iónica similar a la que es fisiológicamente el interior del citoplasma de la célula (0,2 M) y de pH fisiológico (7,4). Usamos tampón fosfato salino (0,161 M, pH 7,4), complementado con un cóctel de inhibidores de la proteasa (Sigma-Aldrich, el catálogo no P8340-1 ml). </li><li> Añadir la glándula pituitaria en el búfer antes de la homogeneización, y luego colocar el generador (5 mm de diámetro) de la homogeneizador Polytron en la parte inferior del tubo Falcon. Homogeneizar a máximas rpm durante 30 segundos, moviendo suavemente el tubo Falcon arriba y hacia abajo mientras lo mantiene en el baño de hielo. Luego, el resto del homogeneizado en hielo durante 1 min. Repita la homogeneización y refrigeración pasos dos veces más. Esta homogeneización suave debe romper las células y liberar las proteínas citosólicas sin interrumpir los núcleos. </li><li> Para eliminar los núcleos, el tejido roto y materiales insolubles (por ejemplo, tejido conectivo y los complejos de proteínas desnaturalizadas), se centrifuga el homogeneizado a baja velocidad (1000 g) durante 10 min a 4 ° C. </li><li> Transferir el sobrenadante (que ahora se llama post-nuclear sobrenadante, PNS) a un nuevo tubo Falcon, teniendo cuidado de dejar la bolita sin tocar, y almacenar el SNP en el hielo. </li><li> Resuspender el precipitado en el volumen original de tampón de homogeneización (250 l de tampón por cada 100 glándulas pituitarias recogidos), homogeneizar el anterior, se centrifuga como antes, y luego combinar el SNP segundo con el primero. </li><li> Alícuota de los dos combinados PNS muestras en tubos de microcentrífuga y se almacena a -80 ° C hasta que esté listo para el siguiente paso. Esta preparación de proteínas puede ser almacenado a -80 ° C, pero poco a poco pierde su potencia, lo que se recomienda para utilizar antes de 6 meses a partir de la preparación. Use una pequeña alícuota para determinar el rendimiento de proteína y la concentración por el ensayo BCA (Pierce catálogo no. 23.225), y la calidad de las proteínas por electroforesis en gel. En general, se obtienen alrededor de 60 mg de proteína de 300 hipófisis de ratón en 1,5 ml de tampón de homogeneización, a una concentración de alrededor de 40 mg / ml. </li></ol> Paso 3. Preparación de la emulsión para la inmunización <ol><li> Descongele rápidamente las alícuotas congeladas proteína necesaria para el experimento y ajustar la concentración de proteínas y 20 mg / ml. Este extracto de proteínas se emulsiona 1:1 con adyuvante completo de Freund (CFA, Sigma F-5881) que contiene 5 mg / mL de calor mató a Mycobacterium tuberculosis (Becton Dickinson, 231 141). Cada ratón recibirá 1 mg de extracto de pituitaria en 100 L de la emulsión. </li><li> El ejemplo anterior es para inmunizar a 10 ratones, en la que cada ratón inyectado con 100 L de la emulsión que contiene 1 mg de proteínas de la hipófisis. Permitir que dos ratones más por la pérdida de material durante la preparación, a fin de utilizar 12 mg de proteínas de la hipófisis. Aspire 600 l de los 20 mg / ml de extracto de proteína de la pituitaria anterior describe con una jeringa de 2,5 ml Hamilton gas. Resuspender el Comité de Libertad Sindical por agitación, y aspiran 600 l de CFA en otra jeringa de 2,5 ml Hamilton. Adjuntar y asegurar una de calibre 22 micro-emulsión aguja en la jeringa llena de CFA. Empuje lentamente el émbolo de la jeringa CFA de tal manera que la aguja está lleno de CFA, a continuación, colocar y fijar el otro extremo de lala aguja de la jeringa llena con extracto de pituitaria. </li><li> Avanzar lentamente el émbolo de la jeringa CFA para impulsar el componente de aceite en el extracto acuoso pituitaria, de tal manera que sólo una pequeña cantidad se mezcla. A continuación, empuje el émbolo de la jeringa extracto de pituitaria en la jeringa CFA. Repita esta acción aumentando gradualmente la cantidad de material mezclado. Continúe hasta que todo el contenido de las dos jeringas se mezclan. Usted obtendrá una solución blanquecina y uniformemente distribuida que representa la emulsión de agua en aceite. </li><li> Una vez que la emulsión se forma, repita el movimiento hacia adelante y hacia atrás por lo menos 500 veces para asegurarse de que la emulsión se mezcla bien. Después de que el ciclo de mezclado final, la 1:01 de agua en emulsión de aceite está listo para usar y contiene una concentración de proteína pituitaria de 10 mg / ml. La emulsión se inyectó el mismo día por vía subcutánea en ratones anestesiados SJL, como se detalla en el artículo JoVe compañero. </li></ol>

<ol><li>Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).</li>
<li>Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+T-lymphocyte-associated+antigen-4+blockage+can+induce+autoimmune+hypophysitis+in+patients+with+metastatic+melanoma+and+renal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer.</a> J Immunother. 28, 593-598 (2005).</li>
<li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).</li>
<li>Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+hypophysitis+and+Hashimoto%27s+disease+in+a+woman%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Anterior hypophysitis and Hashimoto's disease in a woman.</a> J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
</ol>

A pesar de que el primer paciente con hipofisitis autoinmune se informó en 1962 4, los autoantígenos patógenos hipófisis aún no se han identificado 5. Los modelos animales pueden ser muy útiles para identificar a estos autoantígenos, ayudar al descubrimiento de biomarcadores que son traducibles al cuidado del paciente. Este artículo ha demostrado un procedimiento sencillo para la preparación de proteínas de la hipófisis en una forma que es adecuada para la inducción de hipofisitis autoinmune en ani...

<table><tbody><tr><td>Tubos Falcon de 15 ml</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tampón de homogenización</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cóctel de inhibidores de proteasas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Homogeneizador Polytron</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ensayo BCA</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Adyuvante completo de Freund&amp;rsquo;s (CFA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F-5881</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis</td><td>BD Biosciences</td><td>231141</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa hermética de 2,5 mL de Hamilton</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aguja microemulsionante de calibre 22</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

preparación de inmunógeno ratón hipófisis para la inducción de la hipofisitis autoinmune experimental

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Hipofisitis autoinmune es una inflamación crónica de la glándula pituitaria causado o acompañado por una autoinmunidad. Tradicionalmente se ha considerado una enfermedad rara, pero la información se ha incrementado notablemente en los últimos años. Hipofisitis, de hecho, no es raro desarrolla como un &quot;efecto secundario&quot; en pacientes con cáncer tratados con anticuerpos que bloquean los receptores inhibitorios expresa en los linfocitos T, tales como CTLA-4 2 y los receptores de PD-1. Hipofisitis autoinmune puede ser inducida experimentalmente mediante la inyección de ratones con las proteínas de la hipófisis se mezcla con un adyuvante 3. En este artículo de vídeo que muestra cómo extraer las proteínas de ratón glándulas pituitaria y la forma de prepararlos de forma adecuada para la inducción de hipofisitis autoinmune en ratones SJL.

Hipofisitis autoinmune se puede reproducir en ratones mediante la inyección de un extracto de proteínas de ratón pituitaria.

Preparación de inmunógeno ratón hipófisis para la inducción de la hipofisitis autoinmune experimental

La hipofisitis autoinmune es una inflamación crónica de la glándula pituitaria causada o acompañada por autoinmunidad1. Tradicionalmente se ha considerado una...

La hipofisitis autoinmune se caracteriza por un agrandamiento de la glándula pituitaria y una deficiencia en una o más hormonas hipofisarias. Los autoantígenos causantes permanecen desconocidos. Aquí se demuestra un protocolo para preparar proteínas de la glándula pituitaria de ratón para su uso en el estudio de esta enfermedad.Primero se aíslan las glándulas pituitarias de ratones sacrificados. Luego, las pituitarias se homogenizan para romper mecánicamente las células y liberar las proteínas citosólicas. El homogenato se clarifica mediante centrifugación a baja velocidad y se evalúa su cantidad mediante un ensayo colorimétrico de BCA y su calidad mediante electroforesis en gel de poliacrilamida.Finalmente, el homogenato acuoso de proteínas se mezcla con un adyuvante oleoso. Esta mezcla se inyecta luego en ratones para crear un modelo murino que se asemeja a la hipofisitis autoinmune. Como se muestra en el video complementario, se han descrito cuatro técnicas para inducir hipofisitis en animales experimentales.La técnica presentada en este artículo, que consiste en la inyección de una mezcla de proteínas hipofisarias con adyuvante de gripe, es la más antigua, que data de la década de 1960. Otros enfoques han sido la inyección de glicoproteínas solubles del virus de la rubéola en 1992, la inyección estereotáxica de un adenovirus directamente en la glándula pituitaria en 2002, y el trasplante de glándula pituitaria de una cepa de rata bajo la cápsula renal de otra cepa de rata en 2010. La principal ventaja del enfoque con adyuvante de Florence es que actualmente es menos invasivo, más consistente y, sobre todo, más preciso para inducir una enfermedad que se asemeja estrechamente a la enfermedad humana.Aunque se ha informado desde la década de 1960, la técnica del adyuvante extranjero tuvo un desempeño deficiente para la inducción de hipofisitis. Cuando comencé mi trabajo de doctorado, solo podía obtener una incidencia y gravedad modestas de hipofisitis utilizando el protocolo publicado con adyuvante extranjero. Las cosas mejoraron significativamente cuando se me ocurrió la idea de aumentar diez veces la cantidad de proteínas de la hipófisis contenidas en la emulsión EM.Aunque este método puede proporcionar información sobre la patogénesis de la hipofisitis autoinmune, también puede utilizarse para estudiar otras enfermedades autoinmunes cuyos autoantígenos aún no se han identificado. Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades principalmente con el último paso, la preparación del margen, ya que requiere habilidades manuales, tiempo y dedicación. Por ello, la demostración visual es fundamental para comprender cómo debe prepararse una emulsión adecuada.La implicación de esta técnica va más allá del campo de la autoinmunidad. Saber cómo preparar el antígeno inmunizante también puede utilizarse en la producción de anticuerpos monoclonales o para probar nuevas vacunas. Esta técnica será demostrada por S Zoo Heroic Ura y Mayland al Gato de mi laboratorio.La glándula pituitaria del ratón es una glándula con forma cilíndrica que se sitúa en la base del cráneo, en una depresión del hueso esfenoides denominada fosa hipofisaria. La glándula está limitada lateralmente por los nervios trigéminos y anteriormente por el quiasma óptico. Está compuesta por un lóbulo anterior más grande y por lóbulos intermedio y posterior más pequeños.Para aislar la glándula pituitaria, use tijeras para decapitar al ratón eutanasiado, luego realice cortes paralelos desde la parte posterior hasta la frontal del cráneo. Levante el cerebro y dóblelo hacia atrás para exponer la glándula pituitaria, que aparece como un cilindro en el contexto de un triángulo isósceles. Teniendo a la glándula pituitaria como base, a los nervios trigéminos como lados y al quiasma óptico como vértice.Rodee la glándula con las puntas de las pinzas cerradas para romper las meninges circundantes. Luego, utilizando pinzas finas, tome la hipófisis de la fosa turca y colóquela en un tubo de plástico sobre hielo seco. Para una preparación, recolecte 300 glándulas hipofisarias de ratón.Esta colección requiere aproximadamente nueve horas-persona. Una vez completada la recolección, almacene las glándulas pituitarias a menos 80 grados Celsius hasta que sean necesarias. Coloque un tubo Falcon de 15 mililitros en un baño de hielo.Agregue al tubo 250 microlitros de tampón de homogenización. Por cada 100 hipófisis recolectadas justo antes de la homogenización, añada las glándulas hipofisarias de ratón al tampón. A continuación, coloque la punta del homogenizador Polytron, un generador de cinco milímetros de diámetro, en el fondo del tubo Falcon que contiene las hipófisis de ratón y el tampón, y homogenice a velocidad máxima durante 30 segundos.Mueva suavemente el tubo hacia arriba y hacia abajo mientras lo mantiene sobre hielo. Luego, deje reposar el homogenato sobre hielo durante un minuto. Repita los pasos de homogenización y enfriamiento otras dos veces.Esta homogenización suave debe romper las células y liberar las proteínas sin romper los núcleos. Centrifugar el homogenato a baja velocidad, aproximadamente 1000 G durante 10 minutos a cuatro grados Celsius para sedimentar los núcleos, el tejido no roto y los materiales insolubles, como el tejido conectivo y los complejos de proteínas desnaturalizadas. Tener cuidado de no perturbar el precipitado.Transfiera la SNA, ahora denominada sobrenadante postnuclear o PNS, a un nuevo tubo Falcon. Mantenga el PNS en hielo, retire el pellet utilizando el mismo volumen de tampón de homogenización que antes, homogenice y centrifugue como anteriormente. Después de reunir las dos muestras de PNS, alícuote la solución en varios tubos pequeños para microcentrífuga.Guarde los tubos de microcentrífuga a menos 80 grados Celsius hasta que sean necesarios. Esta preparación de proteína es estable a menos 80 grados Celsius, pero pierde gradualmente su potencia. Por lo tanto, se recomienda utilizarla dentro de los seis meses posteriores a su preparación.Guarde una pequeña alícuota del SNT para determinar el rendimiento y la concentración de proteína mediante el ensayo del ácido biy. Luego, determine la calidad de la proteína mediante electroforesis en gel a partir de 300 glándulas hipofisarias de ratón, que en promedio tienen un peso total de aproximadamente 570 miligramos. Espere un rendimiento de 60 miligramos de proteínas hipofisarias o un miligramo de proteína por cada 10 miligramos de tejido.La concentración de proteína es típicamente de alrededor de 40 miligramos por mililitro. El ejemplo proporcionado aquí es para inmunizar 10 ratones. Planifique inyectar a cada ratón 100 microlitros de emulsión que contenga un miligramo de proteína de hipófisis, considerando dos ratones adicionales para pérdidas de material durante la preparación; aquí, se preparan 12 miligramos de emulsión de proteína.Comience descongelando rápidamente las alícuotas de proteína congeladas calentándolas en sus manos. Ajuste la concentración de proteína a 20 miligramos por mililitro con PBS. A continuación, aspire 600 microlitros del extracto de proteína de hipófisis correspondientes a 12 miligramos en una jeringa Gas Tite Hamilton de 2,5 mililitros y resuspenda el adyuvante FRONS completo o CFA que contiene cinco miligramos por mililitro de Mycobacterium tuberculosis inactivado por calor, agitándolo manualmente.Luego aspire 600 microlitros de la CFA hacia otra jeringa Hamilton de 2,5 mililitros. Fije y asegure una aguja emulsionadora de calibre 22 a la jeringa llena de CFA. Presione lentamente el émbolo de modo que la aguja se llene con CFA.Luego, sujete y asegure el otro extremo de la aguja a la otra jeringa llena de extracto proteico de hipófisis. Evite atrapar burbujas de aire dentro de las jeringas. Avance lentamente el émbolo de la jeringa de CFA para introducir el componente oleoso en el extracto hipofisario acuoso, de modo que solo se mezcle una pequeña cantidad.Luego, empuje hacia atrás el émbolo de la jeringa de extracto de hipófisis dentro de la jeringa de CFA. Repita esta acción aumentando gradualmente la cantidad de material mezclado hasta que se hayan mezclado por completo todos los contenidos. Este material blanquecino y uniformemente distribuido representa la emulsión de agua y aceite.Una vez formada la emulsión, repita el ciclo completo de ida y vuelta al menos 500 veces. Después del ciclo final, las jeringas contendrán una emulsión de agua y aceite en relación uno a uno, en la que la concentración de proteína hipofisaria es ahora de 10 miligramos por mililitro. La emulsión está lista para usar; para probar su calidad, coloque una gota en un vaso de agua. Si la emulsión se preparó correctamente, la gota permanecerá compacta y tensa sobre la superficie.Si la emulsión es de baja calidad, se extenderá y dividirá en gotas más pequeñas. La emulsión se inyecta el mismo día de su preparación en ratones SJL para inducir hipofisitis autoinmune experimental. Este protocolo se describe detalladamente en el joVE adjunto.Una vez que se ha recolectado la glándula pituitaria y se dominan las técnicas, se puede realizar la instrucción proteica en una hora, recordando trabajar rápidamente y sobre hielo. Durante esta etapa, durante la preparación de la inmersión, que requiere aproximadamente una hora. Recuerde trabajar lentamente y con paciencia en la fase inicial de mezclado tras su desarrollo.Esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la autoinmunidad exploraran los mecanismos mediante los cuales los linfocitos autorreactivos reconocen e infiltran el órgano diana. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo preparar un extracto proteico a partir de la glándula pituitaria de ratón y cómo mezclarlo con adyuvantes de Freund completos para preparar una emulsión lista para usarse como inmunógeno. No olvide que trabajar con jeringas y adyuvantes de Freund completos, que contienen micobacterias de tuberculosis inactivadas y secas, puede ser peligroso si accidentalmente se produce una punción.Por lo tanto, siempre use guantes desechables y deseche las agujas adecuadamente mientras realiza este procedimiento.

preparation-mouse-pituitary-immunogen-for-induction-experimental

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Este video muestra la forma de inducir hipofisitis autoinmune en ratones SJL y la forma de evaluar su gravedad por la histopatología.

La inducción de la hipofisitis autoinmune experimental en ratones SJL

Este video muestra una técnica de homogeneización eficiente para generar una emulsión adyuvante de antígeno para inducir encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) en un modelo murino. La emulsión contiene un autoantígeno, la glicoproteína de oligodendrocitos de mielina (MOG), en la fase acuosa, rodeada por una fase oleosa continua que comprende una bacteria patógena inactivada. La emulsión asegura una liberación sostenida de antígenos para una respuesta inmunitaria prolongada.

Preparación de una emulsión antigénica adyuvante para inducir encefalomielitis autoinmune

El video demuestra la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón mediante la inyección de una combinación de glicoproteínas de oligodendrocitos de mielina y Mycobacterium tuberculosis inactivada. El modelo permite a los investigadores estudiar los mecanismos de la enfermedad y probar intervenciones terapéuticas.

Inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón

En este video, se establece un modelo de ratón de esclerosis múltiple utilizando encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Al ratón se le inyecta una emulsión que contiene un péptido neuronal y un adyuvante, lo que desencadena una respuesta inmunitaria que activa las células T autorreactivas. A esto le sigue una inyección de toxina pertussis (PTX) para aumentar la permeabilidad de la barrera hematoencefálica, lo que permite que las células T autorreactivas se infiltren en el cerebro. Esta...

El trasplante de células madre / progenitoras neuronales (CPN) tiene grandes promesas en neurología regenerativa. La administración sistémica de NPC se ha convertido en el protocolo eficaz, de bajo invasiva, y terapéuticamente muy eficaz para entregar las células madre en el cerebro y la médula espinal de roedores y primates no humanos afectados por daño experimental inflamatoria crónica del sistema nervioso central.

Inyección sistémica de Neuronales células madre / progenitoras en ratones con EAE crónica

En este informe presentamos un protocolo que permite al investigador generar un modelo murino de uveítis intraocular. Más comúnmente conocida como uveítis autoinmune experimental (EAU), este modelo establecido captura muchos aspectos de la enfermedad humana. Aquí, describiremos cómo inducir y monitorear la progresión de la enfermedad utilizando varias lecturas.

Uveítis autoinmune experimental: un modelo de ratón inflamatorio intraocular

El presente protocolo describe la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón utilizando glicoproteína oligodendrocitos de mielina y monitoreando el proceso de la enfermedad utilizando un sistema de puntuación clínica. Los síntomas experimentales relacionados con la encefalomielitis autoinmune se analizan mediante análisis de tomografía microcomputarizada de fémur de ratón y prueba de campo abierto para evaluar el proceso de la enfermedad de manera integral.

Inducción y diversos indicadores de evaluación de la encefalomielitis autoinmune experimental

Se han establecido varios tipos de modelos animales de tiroiditis de Hashimoto, al igual que la tiroiditis autoinmune espontánea en el ratón NOD. Los ratones H-2h4 son un modelo simple y confiable para la inducción de HT. Este artículo describe este enfoque y evalúa el proceso patológico para una mejor comprensión del modelo murino SAT.

Generación de un modelo de tiroiditis autoinmune espontánea en ratones

Para inducir la encefalomielitis autoinmune experimental, un modelo animal de esclerosis múltiple, los ratones son inmunizados con una emulsión de agua en aceite que contiene un autoantígeno y un adyuvante completo de Freund. Si bien existen varios protocolos para la preparación de estas emulsiones, aquí se presenta un protocolo de homogeneización rápido, simple y estandarizado para la preparación de emulsiones.

Un método de homogeneización rápido, simple y estandarizado para preparar emulsiones de antígeno/adyuvante para inducir encefalomielitis autoinmune experimental

La encefalomielitis autoinmune experimental es uno de los modelos murinos de esclerosis múltiple más utilizados. En el protocolo actual, los ratones C57BL/6J de ambos sexos son inmunizados con el péptido glicoproteico de los oligodendrocitos de mielina, lo que resulta principalmente en paresia ascendente de la cola y las extremidades. Aquí discutimos el protocolo de inducción y evaluación de EAE.

Modelización de la esclerosis múltiple en los dos sexos: encefalomielitis autoinmune experimental inducida por MOG35-55

Aprende a preparar proteínas de hipófisis de ratón para estudiar la hipofisitis autoinmune mediante homogeneización y centrifugación. Este protocolo permite investigar los mecanismos de la enfermedad.

Preparación de inmunógeno ratón hipófisis para la inducción de la hipofisitis autoinmune experimental

Explorar más videos