Name: La inducción de la hipofisitis autoinmune experimental en ratones SJL (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Aprende a inducir hipofisitis autoinmune experimental en ratones SJL mediante inyección de inmunógeno hipofisiario y evalúa la severidad mediante histopatología. Este modelo reproduce características de la enfermedad humana.

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Este trabajo fue apoyado por el NIH subvención DK080351 para PC, y por una generosa donación de la familia de Terry y Kristine Gore.

Protocolo experimental Una vez que el inmunógeno pituitaria está preparado (véase el artículo del compañero), se inyecta por vía subcutánea en ratones SJL (de los Laboratorios Jackson, las acciones de 000.686). Una inyección de idéntica se repite 7 días después. Los ratones se utilizan para recoger en vivo y los resultados post-mortem. Paso 1. La inyección subcutánea de inmunógeno hipófisis en ratones SJL Los ratones son los primeros anestesiados mediante la inyección de 0,5 ml de 20 mg / ml 2,2,2-tribromoetanol (Avertin, Islas Turcas y Caicos Estados Unidos, T-1420) por vía intraperitoneal. Los ratones son inyectados por vía subcutánea con 100 l de la emulsión de la hipófisis que, como se indica en el compañero JoVe 2181 artículo, contiene 1 mg de extracto de pituitaria y 0,25 mg de adyuvante completo de Freund. La emulsión se inyecta en la región dorsal izquierda pata trasera ((50 l) y la región inguinal derecha (50 l). La emulsión de la hipófisis se inyecta de nuevo en el día 7 en los sitios opuestos (50 l en la región dorsal derecha y la pierna trasera 50 l en la región inguinal izquierda). Los ratones son monitoreados diariamente por los primeros 3 días y luego semanalmente hasta el día del sacrificio, que por lo general 28 días después de la primera inmunización. Paso 2. Recopilación de los resultados en vivo: ensayos de sangre El tejido más utilizado para evaluar los resultados experimentales, mientras que los ratones siguen vivos es la sangre. La sangre es habitualmente elaborado 14 días después de la primera inmunización para medir los niveles séricos de anticuerpos pituitaria u otros marcadores como citocinas y quimiocinas. Sanguínea de ratones vivos de la siguiente manera. Los ratones se llevan a cabo de forma segura por la piel del cuello y la parte posterior de la mandíbula se encuentra. Una vez que la parte de atrás de la mandíbula se encuentra, 4 mm lancetas se utilizan para perforar el paquete vascular submandibular. Después se recoge la sangre, ejercen presión sobre los de la zona con una gasa con alcohol para evitar un hematoma. La sangre recogida se centrifuga a 2.000 g durante 20 minutos, y se almacenan a -80 ° C hasta su uso. Paso 3. Recopilación de los resultados post-mortem: la hipófisis histopatología Los ratones suelen ser sacrificados 28 días después de la primera inmunización. La característica principal necesarias para establecer el diagnóstico de HAE es la infiltración de la glándula pituitaria por hematopoyéticos de células mononucleares. Los ratones son sacrificados colocándolos en una cámara de plástico sellada que es perfundido con CO 2. Los ratones se mantienen en la cámara para un total de 8 minutos. Después de la eutanasia, la glándula pituitaria se recoge como se describe en el artículo del compañero. Una glándula suprarrenal se ve hinchada y más firmemente adheridas a los alrededores de la duramadre. Pinzas de Sharp se utiliza para aflojar las meninges que rodean la glándula pituitaria. Una vez que se mueve libremente en la pituitaria del hueso esfenoides, uno de los extremos de la glándula pituitaria se sujeta con una pinza y la glándula pituitaria es levantarse con cuidado. La glándula se coloca en un tubo de microcentrífuga que contiene 5 fijador Beckstead es. La glándula pituitaria es fija durante la noche, envuelto en papel de la lente, y se coloca en un casete. Las glándulas se procesan utilizando el siguiente protocolo: <table border="1"><tbody><tr><td> Número de estación </td><td> Reactivo </td><td> Tiempo en minutos </td><td> Temperatura (Celsius) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 70% de alcohol </td><td> 5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 70% de alcohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 95% de alcohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 95% de alcohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 100% de alcohol </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 100% de alcohol </td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 7 </td><td> 100% de alcohol </td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 8 </td><td> xileno </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> xileno </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 10 </td><td> xileno </td><td&gt; 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 11 </td><td> parafina </td><td> 30 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 12 </td><td> parafina </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 13 </td><td> parafina </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr></tbody></table> Después del procesamiento, la glándula pituitaria son embebidos en parafina y al menos 5 secciones no consecutivos (5 m de espesor) se cortan de cada glándula. Después del corte, las glándulas se tiñen con hematoxilina y eosina, y se analizan para cuantificar la infiltración mononuclear. La sección con la infiltración más grave se ha seleccionado para la puntuación. La gravedad se califica sobre la base de una estimación subjetiva del grado de sustitución de la pituitaria anterior o la destrucción por las células inmunes: grado 0, ausencia de enfermedad, grado 1, 2% y un 20% la participación, grado 2, 20% -30%, grado 3, 30% -50%, grado 4, 50% -90%, el 5 º grado, superior al 90%. Todas las secciones están marcados por dos individuos ciegos a la fuente de las secciones.

<ol><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. , (2008).</li>
<li>Twarog, F. J., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+thyroid+autoantibodies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The production of thyroid autoantibodies in mice.</a> J Immunol. 101, 242-2450 (1968).</li>
<li>Patrick, J., Lindstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+response+to+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autoimmune response to acetylcholine receptor.</a> Science. 180, 871-872 (1973).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
<li>Beckstead, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+preservation+of+fixation-sensitive+antigens+in+paraffin-embedded+tissues%3A+addendum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A simple technique for preservation of fixation-sensitive antigens in paraffin-embedded tissues: addendum.</a> J Histochem Cytochem. 43, 345-345 (1995).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+adenophypophysitis%3A+new+experimental+disease+of+the+pituitary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Allergic adenophypophysitis: new experimental disease of the pituitary gland.</a> Science. 158, 1190-1191 (1967).</li>
<li>Yoon, J. W., Choi, D. S., Liang, H. C., Baek, H. S., Ko, I. Y., Jun, H. S., Gillam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+organ-specific+autoimmune+disease%2C+lymphocytic+hypophysitis%2C+in+hamsters+by+recombinant+rubella+virus+glycoprotein+and+prevention+of+disease+by+neonatal+thymectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Induction of an organ-specific autoimmune disease, lymphocytic hypophysitis, in hamsters by recombinant rubella virus glycoprotein and prevention of disease by neonatal thymectomy.</a> Journal of Virology. 66, 1210-1214 (1992).</li>
<li>Davis, J. R., McMahon, R. F., Lowenstein, P. R., Castro, M. G., Lincoln, G. A., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+the+ovine+pituitary+gland+is+associated+with+hypophysitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated gene transfer in the ovine pituitary gland is associated with hypophysitis.</a> J Endocrinol. 173, 265-271 (2002).</li>
<li>Rotondo, F., Quintanar-Stephano, A., Asa, S. L., Lombardero, M., Berczi, I., Scheithauer, B. W., Horvath, E., Kovacs, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenohypophysitis+in+rat+pituitary+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Adenohypophysitis in rat pituitary allografts.</a> Int J Exp Pathol. , (2010).</li>
</ol>

Cuatro técnicas se han reportado para inducir hipofisitis en animales de experimentación. La técnica descrita en este artículo, que es la inyección de proteínas pituitaria mezclada con adyuvante de Freund s, es la más antigua, que data de 1967 6, y se ha mejorado, más recientemente, 1. Otras técnicas son la inyección de glicoproteínas solubles virus de la rubéola en 1992 7, la inyección estereotáxica de un adenovirus directamente en la glándula pituitaria en 2002 8, y el trasp...

<table><tbody><tr><td>Ratones SJL (The Jackson Laboratories)</td><td></td><td>stock 000686</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-Tribrom&amp;#8211;etanol (Avertin)</td><td>TCI America</td><td>T-1420</td><td></td></tr><tr><td>Fijador de Beckstead&amp;rsquo;s</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

la inducción de la hipofisitis autoinmune experimental en ratones sjl

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Hipofisitis autoinmune se puede reproducir experimentalmente mediante la inyección de proteínas de la hipófisis se mezcla con un adyuvante en ratones susceptibles 1. Los modelos de ratón nos permitirá estudiar cómo se desarrollan las enfermedades, a menudo proporciona una buena réplica de los mismos procesos que ocurren en los seres humanos. Para algunas enfermedades autoinmunes, como la diabetes tipo 1A, hay modelos (el ratón NOD), que desarrollan espontáneamente una enfermedad similar a la contraparte humana. Para muchas otras enfermedades autoinmunes, sin embargo, el modelo necesita ser inducida experimentalmente. Un enfoque común a este respecto consiste en inyectar el ratón con un antígeno dominante derivada de la del órgano estudiado. Por ejemplo, los investigadores interesados ​​en la tiroiditis autoinmune inyectar ratones con tiroglobulina 2, y aquellos interesados ​​en la miastenia gravis inyectarles el receptor de acetilcolina 3. Si el autoantígeno para una enfermedad autoinmune en particular no se conoce, los investigadores inyectan un extracto de proteína cruda del órgano blanco de la reacción autoinmune. Para hipofisitis autoinmune, el autoantígeno patógenos (s) aún no se han identificado 4, y por lo tanto una preparación de proteína cruda pituitaria se utiliza. En este artículo de vídeo se demuestra cómo inducir hipofisitis autoinmune experimental en ratones SJL.

Este video muestra la forma de inducir hipofisitis autoinmune en ratones SJL y la forma de evaluar su gravedad por la histopatología.

La inducción de la hipofisitis autoinmune experimental en ratones SJL

La hipofisitis autoinmune puede reproducirse experimentalmente mediante la inyección de proteínas hipofisarias mezcladas con un adyuvante en ratones susceptibles1. El ratón...

La hipofisitis autoinmune se caracteriza por un agrandamiento de la glándula pituitaria y una deficiencia en una o más hormonas hipofisarias. Las causas de los autoantígenos permanecen desconocidas. Un video complementario demuestra un protocolo para preparar un inmunógeno de hipófisis de ratón, que se utilizará aquí para crear un modelo de ratón que se asemeje a la hipofisitis linfocítica autoinmune humana.El inmunógeno de hipófisis se inyecta en una cepa de ratón susceptible. Luego, la inyección se repite siete días después y, tras 14 días, se recoge sangre para estudios de biomarcadores. En el día 28, las glándulas hipófisis se extraen de ratones sacrificados, seccionan y tiñen para determinar el grado de infiltración de leucocitos.La hipofisitis autoinmune es una enfermedad cada vez más reconocida que puede ser difícil de distinguir de otras masas no secretoras de hormonas que se originan en la silla turca. Aunque la enfermedad fue descrita por primera vez hace aproximadamente 50 años, los autoantígenos reconocidos por el sistema inmunitario del paciente en la hipofisitis autoinmune han permanecido elusivos. En 2008, publicamos el desarrollo de un modelo murino que reproduce fi

induction-of-experimental-autoimmune-hypophysitis-in-sjl-mice

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Retardada de hipersensibilidad (DTH) es una reacción inflamatoria mediada por CCR7-T de memoria efectora (TEM) de linfocitos. Aquí se demuestra cómo activar antígenos específicos de células TEM, inducir DTH adoptivos en ratas Lewis y controlar la respuesta inflamatoria.

Inducción y Seguimiento de Adopción de hipersensibilidad retardada en ratas

Hipofisitis autoinmune se puede reproducir en ratones mediante la inyección de un extracto de proteínas de ratón pituitaria.

Preparación de inmunógeno ratón hipófisis para la inducción de la hipofisitis autoinmune experimental

El video demuestra la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón mediante la inyección de una combinación de glicoproteínas de oligodendrocitos de mielina y Mycobacterium tuberculosis inactivada. El modelo permite a los investigadores estudiar los mecanismos de la enfermedad y probar intervenciones terapéuticas.

Inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón

En este video, se establece un modelo de ratón de esclerosis múltiple utilizando encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Al ratón se le inyecta una emulsión que contiene un péptido neuronal y un adyuvante, lo que desencadena una respuesta inmunitaria que activa las células T autorreactivas. A esto le sigue una inyección de toxina pertussis (PTX) para aumentar la permeabilidad de la barrera hematoencefálica, lo que permite que las células T autorreactivas se infiltren en el cerebro. Esta...

La transferencia de linfocitos bm12 a un receptor C57BL/6 es un modelo establecido de lupus eritematoso sistémico. Aquí describimos cómo iniciar la enfermedad utilizando este modelo y cómo caracterizar las células T foliculares auxiliares, las células B del centro germinal y las células plasmáticas mediante citometría de flujo.

El inducible Modelo BM12 del lupus eritematoso sistémico (LES) en ratones C57BL / 6 ratones

Este manuscrito describe los métodos para la inducción y puntuación del modelo experimental de encefalomielitis autoinmune (EAE), junto con la evaluación de la distribución de células inmunitarias y los niveles de citocinas de ARNm en ganglios linfáticos, bazo, sangre y médula espinal mediante citometría de flujo y PCR cuantitativa, respectivamente, en varias fases de la enfermedad.

La inducción de la encefalomielitis autoinmune experimental en ratones y evaluación de la distribución de la enfermedad dependiente de las células inmunes en diversos tejidos

Este informe describe un enfoque simple para inducir con éxito neuritis autoinmune experimental (EAN) utilizando la mielina proteína cero (P0)180-199 péptido en combinación con adyuvante completo de Freund y toxina del pertussis. Presentamos un paradigma sofisticado capaz de evaluar con precisión la magnitud de los déficits funcionales y neuropatología que ocurren en este EAN.

Un enfoque Simple para inducir Neuritis Autoinmune Experimental en ratones C57BL/6 para las evaluaciones funcionales y Neuropathological

Describimos un modelo de inmunización in vivo, traslacional de hepatitis en ratones BALB / c que se puede utilizar para estudiar la patogénesis de la hepatitis autoinmune inducida por medicamentos, incluidas las diferencias de sexo observadas en esta enfermedad. Describiremos cómo este modelo demuestra análisis reproducibles utilizando técnicas experimentales in vivo e in vitro.

Inducción de hepatitis autoinmune inducida por fármacos en ratones BALB/c para el estudio de sus mecanismos patógenos

Se han establecido varios tipos de modelos animales de tiroiditis de Hashimoto, al igual que la tiroiditis autoinmune espontánea en el ratón NOD. Los ratones H-2h4 son un modelo simple y confiable para la inducción de HT. Este artículo describe este enfoque y evalúa el proceso patológico para una mejor comprensión del modelo murino SAT.

Generación de un modelo de tiroiditis autoinmune espontánea en ratones

La encefalomielitis autoinmune experimental es uno de los modelos murinos de esclerosis múltiple más utilizados. En el protocolo actual, los ratones C57BL/6J de ambos sexos son inmunizados con el péptido glicoproteico de los oligodendrocitos de mielina, lo que resulta principalmente en paresia ascendente de la cola y las extremidades. Aquí discutimos el protocolo de inducción y evaluación de EAE.

Modelización de la esclerosis múltiple en los dos sexos: encefalomielitis autoinmune experimental inducida por MOG35-55

Aquí, presentamos un protocolo que establece un modelo de ratón con artritis reumatoide (AR) a través de la transferencia adoptiva de células T CD4+ de ratones SKG, proporcionando una herramienta experimental rápida y confiable para investigar los mecanismos inmunológicos, la progresión patológica y el desarrollo de nuevos tratamientos para la AR.

Un modelo adoptivo de transferencia de artritis reumatoide en ratones

Aprende a inducir hipofisitis autoinmune experimental en ratones SJL mediante inyección de inmunógeno hipofisiario y evalúa la severidad mediante histopatología. Este modelo reproduce características de la enfermedad humana.

La inducción de la hipofisitis autoinmune experimental en ratones SJL

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