Determinar el número de células durante el cultivo celular utilizando el contador de células Cetro

El contador de células con cetro es un dispositivo portátil y automatizado para contar células, monitorear el diámetro y el volumen de las células, y verificar la salud y la calidad de las poblaciones celulares. Ofrece ventajas significativas sobre otros métodos de conteo, incluida la precisión mejorada, la facilidad de uso y el bajo costo de contar celdas. Con el cetro, siga las instrucciones de su pantalla gráfica para aspirar las células en el sensor desechable.

A continuación, se cuentan las células y el dispositivo informa de las concentraciones de células y las estadísticas, que pueden cargarse en un ordenador y analizarse. Hola, soy Sonya. Soy un científico investigador aquí en Millport, y hoy les voy a mostrar cómo usar el cetro.

El recuento de células es un paso necesario pero tedioso para el cultivo celular in vitro. Las concentraciones celulares constantes garantizan la reproducibilidad y la precisión experimentales. Los recuentos celulares son importantes para monitorear la salud celular y la tasa de proliferación, evaluar las células inmortales o de siembra en transformación para experimentos posteriores, transfección o infección, y prepararse para ensayos basados en células a pesar de la necesidad de velocidad y precisión.

En el recuento de células, el 71% de los 400 investigadores encuestados contaron las células utilizando un hemocitómetro. Si bien la hemocitometría es económica, es laboriosa y está sujeta al sesgo del usuario y al mal uso, lo que da lugar a recuentos inexactos. Las fuentes de error en la hemocitometría incluyen una distribución desigual de las células en la muestra, demasiadas o muy pocas células en la muestra.

Decisiones subjetivas sobre si una celda determinada se encuentra dentro del área de conteo definida. Contaminación del hemocitómetro, variación del usuario y variación de la tasa de llenado del hemocitómetro para aliviar el tedio asociado con el conteo manual. El 29% de los investigadores cuentan las células utilizando dispositivos automatizados de recuento de células.

Sin embargo, para la mayoría de los investigadores, el precio asociado con estos grandes instrumentos de sobremesa es una barrera para su uso. El contador de celdas con cetro es un dispositivo portátil automatizado que ofrece la automatización y la precisión del conteo de coter a un costo relativamente bajo en un formato de mano fácil de usar. El sistema emplea el principio de Coter de detección de partículas basada en impedancia en un formato miniaturizado utilizando una combinación de hardware analógico y digital para el procesamiento de señales de detección, el almacenamiento de datos y la visualización gráfica.

El sensor desechable está diseñado con una zona de detección de celdas microfabricada que permite la discriminación por tamaño de celda y volumen de celda con resolución submicrónica y subpicolitro mejorada con electrónica y canales de manejo de líquidos de precisión. El contador de células con cetro muestra gráficamente las estadísticas de población de células como un histograma que se va a utilizar. El contador de células cetro comienza diluyendo una suspensión de células individuales en solución salina tamponada con fosfato.

Una concentración de 10.000 a 500.000 células por mililitro es óptima. Transfiera 100 microlitros de células diluidas a un tubo de microview de 1,5 mililitros. Enciende el contador de celdas del cetro manteniendo presionado el interruptor en la parte posterior del instrumento y espera a que aparezcan las instrucciones en pantalla.

Cuando se le solicite, conecte un sensor al extremo de la unidad de cetro con el panel de detección de electrodos hacia la parte delantera del instrumento. Los sensores Scepter constan de una cámara de muestreo moldeada con precisión con una zona de detección electrónica y electrodos de detección de celda integrados. Los sensores permiten discriminar el tamaño de la célula con una resolución submicrónica y el volumen de la célula con una resolución subpicolitro.

La ingeniería coherente de los sensores garantiza que se cuenten volúmenes de muestra iguales y que se realicen mediciones de tamaño precisas. Una vez que el sensor esté conectado, realice cada paso del proceso de conteo de acuerdo con las instrucciones en pantalla de la siguiente manera. Cuando la pantalla lea, mantenga presionado el émbolo para comenzar a presionar el émbolo, la pantalla luego leerá sumergir el sensor, sumergir el sensor en la solución de suspensión de celdas y soltar el émbolo para aspirar la suspensión de celdas en el sensor.

El émbolo actúa como una señal eléctrica y extraerá la muestra más el volumen muerto hacia el sensor. La velocidad o la precisión de la inmersión no importan, como ocurre con el pipeteo. Este proceso tardará varios segundos cuando esté listo.

El instrumento emitirá un pitido y la muestra cargada se mostrará en la pantalla. Una vez que la muestra se carga en el sensor, se extrae a través de la zona de detección para evaluar el tamaño y el volumen de la celda. Luego, a través de los microcanales, una vez que se cuentan 50 microlitros de muestra, el sensor le dice al instrumento que deje de contar.

Una vez completado el conteo, la pantalla del instrumento leerá el conteo completo. Retire el sensor y deséchelo. Siga las instrucciones y retire y deseche el sensor.

A continuación, el instrumento mostrará un histograma del tamaño o diámetro de la célula en su pantalla, así como la concentración de células por mililitro. Una vez que se complete el conteo y se muestre el histograma en el instrumento, aplique puertas presionando el botón de alternancia, seleccione compuerta automática o use last para establecer automáticamente la puerta en función del perfil del histograma o para usar las puertas del conteo anterior. Independientemente de la selección, las puertas se pueden mover manualmente a finas.

Ajuste los datos, presione el botón de alternancia nuevamente para seleccionar la puerta izquierda y desplácese para mover la puerta como desee. A continuación, vuelva a pulsar el interruptor para activar la puerta derecha y desplácese por el interruptor para colocar la puerta derecha. Haga clic de nuevo.

Se mostrará una nueva concentración de células, el volumen medio de células y el diámetro. El interruptor también puede estar a ambos lados para cambiar la visualización entre la fecha, la hora, el tamaño medio de la celda y el volumen medio de la celda, se pueden almacenar hasta 72 histogramas en el propio instrumento. Para cargar los datos en una computadora personal, conecte el instrumento a través del puerto del cable USB, en la pantalla de visualización de la PC.

Haga doble clic en la aplicación de software del cetro para iniciar el software. A continuación, haga clic en conectar. Todos los recuentos se transferirán automáticamente al software.

El software de aplicación del cetro muestra el histograma que detalla la distribución de la población del cultivo en volumen o diámetro. Los archivos descargados se pueden exportar a Microsoft Excel, donde los datos sin procesar se mostrarán en contenedores de diámetros de celda o volúmenes de celda especificados. Se prepararon 19 líneas celulares diferentes para el recuento y se determinaron las concentraciones iniciales teóricas utilizando un contador de afiliador.

A continuación, estas suspensiones celulares se diluyeron aún más para obtener suspensiones celulares a concentraciones celulares teóricas. A continuación, se utilizó el contador de células con cetro para determinar las concentraciones de células. Esta figura muestra cinco diluciones que se midieron para cinco líneas celulares representativas junto con la concentración celular teórica.

El alto grado de linealidad, como lo indican los valores de r cuadrado, demuestra que el conteo de cetros es un método confiable para las líneas celulares probadas en un amplio rango de operación lineal. La precisión relativa general del conteo de cetros se demuestra aquí en el que los datos obtenidos del conteo de cetros se comparan con los recuentos obtenidos del conteo de cetros. El registro de los recuentos de células con cetro se traza con el registro de los recuentos de coter y muestra que en todas las líneas celulares analizadas, los recuentos de cetros coinciden con los recuentos de coter.

Se realizaron recuentos de 19 líneas celulares utilizando un contador Z de dos rejas. El contador de células con cetro, un contador automatizado basado en la visión, como el sistema de prueba de células V o recuento, y un recuento de TER hemo se realizaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante utilizando la misma suspensión de inicio de células e idénticas diluciones. Los resultados mostrados en esta figura demuestran que las concentraciones celulares medidas por el conteo con cetro coinciden estrechamente con las concentraciones celulares teóricas con alta linealidad.

Se calculó el coeficiente porcentual de variación o CV para cada dilución de cada línea celular. Para cada sistema de conteo que se muestra, aquí se muestra el porcentaje promedio de CVS en 19 líneas celulares con respecto a la concentración de celdas y el método de conteo dentro del rango operativo. El contador de células con cetro es más preciso que el conteo de hemocitómetros, mostrando desviaciones estándar más pequeñas y coeficientes de variación promedio más pequeños.

El conteo con cetro es 10 veces más rápido que la hemocitometría y también más rápido que otros contadores automatizados. Aquí se contaron las células SF nueve, MCF siete y HC 2 93 utilizando los métodos descritos en este vídeo. Se registró el tiempo promedio requerido para medir la concentración celular.

Nótese que la hemiocitometría se realizó solo una vez por muestra. Scepter realiza mediciones basadas en el tamaño de la celda. Por lo tanto, cualquier cambio en la morfología celular se puede capturar en el histograma.

Los cultivos sanos muestran una buena distribución gaussiana en forma de campana, mientras que las células enfermas pican y causan un cambio en el histograma hacia la izquierda. De manera similar, cuando se mezcló una población de 50% de células muertas con 50% de células vivas, también se observaron cambios en el histograma. Acabo de mostrarles cómo usar el nuevo contador de células con cetro para miliporos, que está revolucionando la forma en que los investigadores cuentan sus células.