Name: Determinar el número de células durante el cultivo celular utilizando el contador de células Cetro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-26T18:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: Aprende a contar células con el contador Scepter, un dispositivo portátil automatizado que mejora la precisión y reproducibilidad en cultivos celulares. Este método reduce el sesgo del usuario y acelera el análisis.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. La importancia de contar con celular <ol><li> Contando las células es un paso necesario pero aburrido para el cultivo celular in vitro. </li><li> Concentraciones consistentes celular asegurar la reproducibilidad experimental y precisión. </li><li> Los recuentos de células son importantes para la vigilancia de la salud celular y la tasa de proliferación, la evaluación de la inmortalización y transformación, la siembra de células de experimentos posteriores, transfección o infección, y la preparación de ensayos basados ​​en células. </li><li> A pesar de la necesidad de velocidad y la precisión en el recuento de células, el 71% de los investigadores encuestaron a 400 células cuentan con un hemocitómetro. Mientras hemocytometry es barato, es laborioso y sujeto a un sesgo de usuario y el uso indebido, que se traduce en cuenta inexacta. </li><li> Fuentes de error en hemocytometry incluyen: la distribución desigual de células en la muestra, de más o de muy pocas células en la muestra, las decisiones subjetivas en cuanto a si una célula dada entra en el área de conteo definido, la contaminación del hemocitómetro, de usuario a usuario variación , y la variación de la tasa de llenado hemocitómetro. </li><li> Para aliviar el tedio asociado con el conteo manual, el 29% de los investigadores cuentan las células se utilizan dispositivos automáticos conteo de células. Sin embargo, para la mayoría de los investigadores, el precio asociado con estos grandes de banco de instrumentos es una barrera para su uso. </li><li> El contador de células cetro es un dispositivo automático de mano que ofrece la automatización y la exactitud del conteo Coulter, a un costo relativamente bajo. </li><li> El sistema utiliza el principio de la detección de partículas Coulter impedancia basada en un formato de miniatura utilizando una combinación de hardware analógico y digital para la detección, procesamiento de señales, almacenamiento de datos y visualización gráfica. </li><li> El sensor desechable se ha diseñado con un microfabricated, la célula de detección de la zona que permite la discriminación por tamaño de la celda y el volumen celular en el sub-micrones y la resolución de sub-picolitros. </li><li> Mejorado con una precisión de manejo de líquidos de los canales y la electrónica, el contador de células cetro muestra gráficamente las estadísticas de la población de células en forma de histograma. </li></ol> 2. Preparación de una suspensión de una sola célula para el recuento <ol><li> Para utilizar el contador celular Scepter, empezar por la dilución de una suspensión de células individuales de las células, en tampón fosfato salino. Una concentración de 10,000-500,000 células por ml es lo óptimo. </li><li> Transferencia de 100 L de células diluidas a un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. </li></ol> 3. Realizar recuentos de células usando el cetro <ol><li> Encienda el contador de células Cetro pulsando y manteniendo pulsado el conmutador en la parte posterior del instrumento y esperar las instrucciones en pantalla para aparecer. </li><li> Cuando se le solicite, conecte un sensor al final de la unidad cetro con el panel de electrodo sensor mirando hacia la parte frontal del instrumento. </li><li> Sensores cetro consiste en una cámara de precisión del muestreo, moldeado, con una zona de detección electrónica e integrada electrodos de detección de células. Los sensores permiten discriminar el tamaño de celda en el sub-micras de resolución, y el volumen celular en el sub-picolitros resolución. </li><li> Ingeniería sensor consistente, asegura que volúmenes iguales de la muestra se cuentan y las medidas exactas de tamaño se hacen. </li><li> Una vez que el sensor está conectado, lleve a cabo cada paso del proceso de conteo de acuerdo a las instrucciones de la pantalla de la siguiente manera: </li><li> Cuando la pantalla se lee "Mantenga el émbolo para empezar", el émbolo. La pantalla mostrará "sumergir el sensor." Sumerja el sensor en la solución de suspensión celular y la liberación del émbolo para aspirar la suspensión de células en el sensor. </li><li> El émbolo actúa como una señal eléctrica y extraer la muestra, más volumen muerto en el sensor. La velocidad y precisión de sumergirse, no importa como lo hace con la pipeta. Este proceso tardará varios segundos. Cuando esté listo, el instrumento emitirá un pitido, y "Ejemplo de carga" se mostrará en la pantalla. </li><li> Una vez que la muestra se carga en el sensor que se dibuja a través de la zona de detección para evaluar el tamaño celular y el volumen celular, luego a través de los microcanales. Una vez que 50 L de la muestra se cuenta el sensor indica el instrumento para detener el conteo. </li><li> Tras el recuento se ha completado, la pantalla del instrumento mostrará "Conteo Completo. Retire y deseche el sensor". Siga las indicaciones, y retirar y desechar el sensor. </li><li> El instrumento mostrará un histograma de tamaño de la celda o el diámetro de su pantalla, así como la concentración de células por ml. </li></ol> 4. Análisis de Datos <ol><li> Tras el recuento se ha completado y el histograma se muestra en el instrumento, se aplican las puertas pulsando el botón de activación. Seleccione "gating auto" o "último uso" a cualquiera ajusta automáticamente la puerta en función del perfil de histograma, o para usar las puertas de la cuenta anterior. </li><li> Independientemente de la selección, las puertas se pueden mover manualmente para ajustar los datos. Presione el botón de alternar de nuevo para seleccionar la puerta de la izquierda y vaya a laggle para mover la puerta a su gusto. </li><li> A continuación, pulse la palanca de nuevo para activar la puerta de la derecha y desplazar la palanca para colocar la puerta de la derecha. Haga clic de nuevo, una nueva concentración de células, el volumen celular y el diámetro en la pantalla. </li><li> La palanca también se puede mover hacia los lados para cambiar la visualización entre la fecha, la hora, la media de tamaño de la celda, y el volumen celular. </li><li> Hasta 72 histogramas se pueden almacenar en el propio instrumento. Para cargar los datos a un ordenador personal, conecte el instrumento a través del puerto USB del cable en la pantalla. </li><li> En el PC, haga doble clic sobre la Aplicación de Software Cetro para iniciar el software y haga clic en "conectar". Todos los cargos de forma automática el puerto con el software. </li><li> El software de aplicación cetro muestra el histograma que detalla la distribución de la población de la cultura, ya sea en volumen o diámetro. Los archivos descargados pueden ser exportados a Microsoft Excel, donde los datos en bruto se mostrará en los contenedores de los diámetros de celda especificada o volúmenes de la célula. </li></ol> 5. Resultados representante <ol><li> Diecinueve diferentes líneas celulares se prepararon para el recuento y la concentración de partida teórico se determinaron mediante un contador Coulter. Estas suspensiones celulares fueron luego más diluidos para obtener suspensiones celulares en las concentraciones de células teórico. </li><li> El contador de células cetro se utilizó para determinar las concentraciones de células. La figura 1 muestra cinco diluciones que se midieron durante 5 líneas celulares representativas, junto con la concentración de células teórico. </li><li> El alto grado de linealidad, como se indica en los valores R2, demuestra que el conteo de Cetro es un método confiable para las líneas celulares estudiadas, a través de un amplio rango de funcionamiento lineal. </li><li> La precisión global relativa de contar cetro se demuestra en la figura 2, en el que los datos obtenidos de contar cetro se comparan con los recuentos obtenidos a partir de contar Coulter. </li><li> El registro de los recuentos de células cetro se traza contra el registro de la cuenta Coulter, y muestra que, en todas las líneas celulares estudiadas, cuenta Cetro coincidir cuenta Coulter. </li><li> Cuenta de 19 líneas celulares se realizó con un Z2 Coulter Counter, el contador celular Scepter, un contador automatizado basado en visión, como Vi-celular o sistema, comercios, y un hemocytemeter. </li><li> Los conteos se realizaron de acuerdo a las instrucciones del fabricante, utilizando la misma célula de partida suspensión y las diluciones idénticos. Los resultados mostrados en la Figura 3 demuestran que las concentraciones de células medida por cetro contar asemejan las concentraciones teóricas de células con una alta linealidad. </li><li> El coeficiente de variación por ciento, o CV, se ha calculado para cada dilución de cada línea celular para cada sistema de conteo. La Figura 4 muestra el CV% promedio de más de 19 líneas de células con respecto a la concentración de células y el método de recuento. </li><li> Dentro del rango de funcionamiento, el contador de células cetro es más preciso que el recuento del hemocitómetro visión basada, mostrando pequeñas desviaciones estándar y pequeños coeficientes promedio de la variación. </li><li> Contar cetro es diez veces más rápido que hemocytometry y más rápido que otros contadores automatizados también. En la figura 5, SF9, MCF7, y las células HEK293 se contaron usando los métodos descritos en este video. </li><li> El tiempo medio necesario para medir la concentración de células fue grabada. Tenga en cuenta que hemocytometry se llevó a cabo una sola vez por cada muestra. </li><li> Cetro que hace las mediciones basadas en el tamaño celular. Así, cualquier cambio en la morfología celular puede ser capturado en el histograma. Culturas saludables presenta una distribución en forma de campana de Gauss agradable, mientras que las células enfermas, lisis, y provocar un cambio en el histograma a la izquierda (Figura 6, panel izquierdo). </li><li> Del mismo modo, cuando una población de células muertas el 50% se mezclaron con las células del 50% en vivo, los cambios también se observaron histograma (Figura 6, panel derecho). </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig1.jpg" alt="Figura 1"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig2.jpg" alt="Figura 2"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig3.jpg" alt="Figura 3"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig4.jpg" alt="Figura 4"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig5.jpg" alt="Figura 5"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig6.jpg" alt="Figura 6"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig7.jpg" alt="Figura 7">

<ol><li>Barghshoon, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarghshoon%2C+S+%22Cell+Counting+Survey%22">Cell Counting Survey</a>. , Millipore. (2009).</li>
<li>Tucker, K. G., Chalder, S., al-Rubeai, M., Thomas, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+hybridoma+cell+number%2C+viability%2C+and+morphology+using+fully+automated+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Enzyme+Microb+Technol%22%5BJournal%5D)">Measurement of hybridoma cell number, viability, and morphology using fully automated image analysis.</a> Enzyme Microb Technol. 16 (1), 29-35 (1994).</li>
<li>Houwen, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHouwen%2C+B+%22Fifty+years+of+hematology+innovation%3A+the+Coulter+principle%22">Fifty years of hematology innovation: the Coulter principle</a>. , Medical Laboratory Observer. (2003).</li>
</ol>

Kathleen Ongena, Das Chandreyee, Janet L. Smith, Gil Sonia, y Johnston Gracia son empleados por Millipore, que produce los instrumentos utilizados en este artículo.

Comparar el desempeño del contador de células Cetro de los resultados de otros métodos de recuento, se concluye que este nuevo contador de mano, de células automatizado proporciona el recuento de células precisa, rápida y confiable sobre un amplio rango de operación. La funcionalidad de contar Cetro es el resultado de la tecnología de ingeniería de precisión incrustado en la punta del sensor y la instrumentación de contar sofisticado basado en el principio de Coulter. La calidad del desempeño sugiere Cetro contando como método para aumentar la velocidad y mejorar la reproducibilidad de los ensayos basados ​​en células. Su formato de mano permite que el tedio rápida sin derecho a contar desde la capilla de cultivo de células.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del Material </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentario </td></tr><tr><td> Cetro de mano 2,0 contador celular automático con 40 sensores micras Cetro </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20040 </td><td></td></tr><tr><td> Cetro de mano 2,0 contador celular automático con 60 sensores Cetro m </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20060 </td><td></td></tr><tr><td> Sensores cetro, 60 micras </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC60050 </td><td> 50 unidades de sensores </td></tr><tr><td> Sensores cetro, 40 m </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC40050 </td><td> 50 unidades de sensores </td></tr><tr><td> Adaptador universal de energía </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCPOWER </td><td> </td></tr><tr><td> Cetro de O-Ring Kit </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCOCLIP </td><td> 2 anillos y una tapa del filtro </td></tr></tbody></table>

determinar el número de células durante el cultivo celular utilizando el contador de células cetro

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

El recuento de células es a menudo un paso necesario, pero tedioso para cultivo celular in vitro. Concentraciones consistentes celular asegurar la reproducibilidad experimental y precisión. Los recuentos de células son importantes para la vigilancia de la salud celular y la tasa de proliferación, la evaluación de la inmortalización y transformación, la siembra de células de experimentos posteriores, transfección o infección, y la preparación de ensayos basados ​​en células. Es importante que el recuento de células se precisa, coherente y rápida, en particular para la medición cuantitativa de la respuesta celular. A pesar de esta necesidad de la velocidad y la precisión en el recuento de células, el 71% de los 400 investigadores encuestaron a una que cuentan las células utilizando un hemocitómetro. Mientras hemocytometry es barato, es laborioso y sujeto a un sesgo de usuario y el uso indebido, que se traduce en cuenta inexacta. Hemocytometers están hechas de vidrio óptico especial en el que las suspensiones celulares se cargan en los volúmenes especificados y contados bajo un microscopio. Fuentes de errores en hemocytometry incluyen: la distribución desigual de células en la muestra, de más o de muy pocas células en la muestra, las decisiones subjetivas en cuanto a si una célula dada entra en el área de conteo definido, la contaminación del hemocitómetro, de usuario a usuario variación , y la variación de la tasa de llenado de 2 hemocitómetro. Para aliviar el tedio asociado con el conteo manual, el 29% de los investigadores cuentan con las células de células automatizado contar los dispositivos, que incluyen la visión basada en los contadores, sistemas que detectan las células utilizando el principio de Coulter, o citometría de flujo 1. Para la mayoría de los investigadores, la principal barrera a la utilización de un sistema automatizado es el precio asociado con estos grandes instrumentos de sobremesa 1. El contador de células cetro es un dispositivo automático de mano que ofrece la automatización y la exactitud del conteo Coulter, a un costo relativamente bajo. El sistema utiliza el principio de la detección de partículas Coulter impedancia basada en tres en un formato de miniatura utilizando una combinación de hardware analógico y digital para la detección, procesamiento de señales, almacenamiento de datos y visualización gráfica. La punta desechable se ha diseñado con un microfabricated, células de detección de la zona que permite la discriminación por tamaño de la celda y el volumen celular a nivel sub-micrones y la resolución de sub-picolitros. Mejorado con una precisión de manejo de líquidos de los canales y la electrónica, el contador de células Cetro informes de estadísticas de la población de células muestran gráficamente en forma de histograma.

El contador de células cetro es un dispositivo portátil automatizado que puede ser usado para contar las células, monitor diámetro de la celda y el volumen, y ser usado para controlar la salud y la calidad de las poblaciones celulares de una cultura a otra.

Determinar el número de células durante el cultivo celular utilizando el contador de células Cetro

El recuento celular es a menudo un paso necesario pero tedioso para el cultivo celular in vitro. Las concentraciones celulares constantes garantizan la reproducibilidad experimental y...

El contador de células Scepter es un dispositivo automático portátil para contar células, monitorear el diámetro y el volumen celular, y verificar la salud y calidad de las poblaciones celulares. Ofrece ventajas significativas frente a otros métodos de conteo, incluyendo mayor precisión, facilidad de uso y bajo costo para contar células. Utilizando el Scepter, siga las instrucciones en su pantalla gráfica para aspirar las células hacia el sensor desechable.A continuación, se cuentan las células y el dispositivo informa las concentraciones celulares y estadísticas, que pueden cargarse en una computadora y analizarse. Hola, soy Sonya. Soy científica investigadora aquí en Millport, y hoy les mostraré cómo usar el scepter.Contar células es un paso necesario pero tedioso en el cultivo celular in vitro. Concentraciones celulares constantes garantizan la reproducibilidad y precisión experimentales. Los recuentos celulares son importantes para monitorear la salud celular y la tasa de proliferación, evaluar células inmortales o transformadas antes de su siembra para experimentos posteriores, transfección o infección, y para prepararse ante ensayos basados en células, a pesar de la necesidad de rapidez y precisión.En el recuento de células, el 71 % de los 400 investigadores encuestados cuentan células utilizando un hemocitómetro. Aunque la hemocitometría es económica, es un proceso laborioso y está sujeto a sesgos y mal uso por parte del usuario, lo que resulta en recuentos inexactos. Las fuentes de error en la hemocitometría incluyen una distribución desigual de las células en la muestra, así como un número excesivo o insuficiente de células en la muestra.Decisiones subjetivas sobre si una célula determinada se encuentra dentro del área definida de conteo. Contaminación del hemocitómetro, variación entre usuarios y variación en la tasa de llenado del hemocitómetro para aliviar la monotonía asociada con el conteo manual. El 29 % de los investigadores cuentan células utilizando dispositivos automatizados de conteo celular.Sin embargo, para la mayoría de los investigadores, el precio asociado con estos grandes instrumentos de banco representa una barrera para su uso. El contador de células Scepter es un dispositivo automático portátil que ofrece la automatización y precisión del conteo Coulter a un costo relativamente bajo y en un formato portátil de fácil uso. El sistema emplea el principio Coulter de detección de partículas basado en impedancia, en un formato miniaturizado, utilizando una combinación de hardware analógico y digital para el procesamiento de señales de detección, almacenamiento de datos y visualización gráfica.El sensor desechable está diseñado con una zona de detección celular microfabricada que permite la discriminación por tamaño celular y volumen celular con resolución submicrométrica y subpicolitro, mejorada con canales de manipulación precisa de líquidos y electrónica. El contador celular Scepter muestra gráficamente las estadísticas de la población celular en forma de histograma para su uso. El contador celular Scepter comienza diluyendo una suspensión individual de células en solución salina tamponada con fosfato.Una concentración de 10 000 a 500 000 células por mililitro es óptima. Transfiera 100 microlitros de células diluidas a un tubo microvisor de 1,5 mililitros. Encienda el contador de células Scepter presionando y manteniendo pulsado el interruptor en la parte trasera del instrumento y espere a que aparezcan las instrucciones en pantalla.Cuando se le indique, sujete un sensor al extremo de la unidad del cilindro, con el panel sensor del electrodo orientado hacia la parte frontal del instrumento. Los sensores Scepter consisten en una cámara de muestreo moldeada con precisión que incluye una zona sensora electrónica y electrodos integrados para la detección celular. Estos sensores permiten discriminar el tamaño celular con resolución submicrométrica y el volumen celular con resolución subpicolitro.Una ingeniería de sensores constante garantiza que se cuenten volúmenes de muestra iguales y que se realicen mediciones precisas de tamaño. Una vez que el sensor esté conectado, realice cada paso del proceso de conteo según las instrucciones en pantalla de la siguiente manera. Cuando la pantalla indique, mantenga presionado el émbolo para comenzar a presionarlo; luego, la pantalla mostrará sumerja el sensor, sumerja el sensor en la solución de suspensión celular y suelte el émbolo para aspirar la suspensión celular hacia el sensor.El émbolo actúa como una señal eléctrica y aspirará la muestra junto con el volumen muerto hacia el sensor. La velocidad o precisión del movimiento del émbolo no es relevante, a diferencia de lo que ocurre con la pipeta. Este proceso tardará varios segundos cuando esté listo.El instrumento emitirá un sonido y en la pantalla se mostrará la muestra cargada. Una vez que la muestra se carga en el sensor, esta es aspirada a través de la zona de detección para evaluar el tamaño celular y el volumen celular. Luego, a través de los microcanales, cuando se han contado 50 microlitros de muestra, el sensor indica al instrumento que detenga el conteo.Una vez finalizada la cuenta, la pantalla del instrumento indicará que la cuenta ha finalizado. Retire el sensor y deséchelo. Siga la indicación y retire, luego deseche, el sensor.El instrumento mostrará entonces un histograma del tamaño o diámetro celular en su pantalla, así como la concentración celular por mililitro. Una vez que el conteo esté completo y el histograma se muestre en el instrumento, aplique compuertas pulsando el botón de alternancia, seleccione la compuerta automática o use la anterior para establecer automáticamente la compuerta según el perfil del histograma o para utilizar las compuertas del conteo previo. Independientemente de la selección, las compuertas pueden ajustarse manualmente para afinarlas.Ajuste los datos, presione nuevamente el botón de alternancia para seleccionar la compuerta izquierda y deslice el control para mover la compuerta según desee. Luego, presione el botón de alternancia nuevamente para activar la compuerta derecha y deslice el control para colocar la compuerta derecha. Haga clic nuevamente.Se mostrará una nueva concentración celular, volumen celular promedio y diámetro. El interruptor también puede moverse hacia cualquier lado para alternar la visualización entre fecha y hora, tamaño medio de la célula y volumen medio de la célula; hasta 72 histogramas pueden almacenarse en el instrumento mismo. Para cargar los datos en una computadora personal, conecte el instrumento mediante el puerto del cable USB, en la pantalla de visualización de la PC.Haga doble clic en la aplicación de software scepter para iniciar el software. Luego haga clic en conectar. Todos los conteos se transferirán automáticamente al software.El software de aplicación scepter muestra el histograma que detalla la distribución poblacional de la cultura en volumen o diámetro. Los archivos descargados pueden exportarse luego a Microsoft Excel, donde los datos brutos se mostrarán en intervalos de diámetros celulares o volúmenes celulares especificados. Se prepararon 19 líneas celulares diferentes para el recuento, y las concentraciones iniciales teóricas se determinaron utilizando un contador de cultivos.Estas suspensiones celulares se diluyeron posteriormente para obtener suspensiones celulares con concentraciones celulares teóricas. Luego se utilizó el contador celular Scepter para determinar las concentraciones celulares. Esta figura muestra cinco diluciones que se midieron para cinco líneas celulares representativas junto con la concentración celular teórica.El alto grado de linealidad, indicado por los valores de r cuadrado, demuestra que el conteo con scepter es un método confiable para las líneas celulares evaluadas en un amplio rango lineal de funcionamiento. La precisión relativa general del conteo con scepter se muestra aquí, en donde los datos obtenidos mediante el conteo con scepter se comparan con los conteos obtenidos mediante el conteo con coter. Se grafica el logaritmo de los conteos celulares con scepter frente al logaritmo de los conteos con coter, lo cual muestra que, en todas las líneas celulares evaluadas, los conteos con scepter coinciden con los conteos con coter.Se realizaron recuentos de 19 líneas celulares utilizando un contador Coulter Z two. El contador celular Scepter, un contador automatizado basado en visión, como el sistema V cell o count test, y los recuentos hemo TER se llevaron a cabo según las instrucciones del fabricante, utilizando la misma suspensión inicial de células y diluciones idénticas. Los resultados mostrados en esta figura demuestran que las concentraciones celulares medidas mediante el recuento con Scepter coinciden estrechamente con las concentraciones celulares teóricas, con alta linealidad.Se calculó el coeficiente de variación porcentual o CV para cada dilución de cada línea celular. Para cada sistema de recuento mostrado, aquí se presentan los CV porcentuales promedio sobre 19 líneas celulares con respecto a la concentración celular y al método de recuento dentro del rango de operación. El contador de células Scepter es más preciso que el recuento con hemocitómetro, mostrando desviaciones estándar menores y coeficientes de variación promedio más reducidos.El conteo con Scepter es 10 veces más rápido que la hemocitometría y también más rápido que otros contadores automatizados. Aquí se contaron células SF nine, MCF seven y HC 2 93 utilizando los métodos descritos en este video. Se registró el tiempo promedio necesario para medir la concentración celular.Tenga en cuenta que la citometría hemática se realizó solo una vez por muestra. Scepter realiza mediciones basadas en el tamaño celular. Por lo tanto, cualquier cambio en la morfología celular puede registrarse en el histograma.Los cultivos sanos muestran una distribución gaussiana en forma de campana bien definida, mientras que las células no viables mueren y provocan un desplazamiento del histograma hacia la izquierda. De manera similar, cuando se mezcló una población con 50 % de células muertas con 50 % de células vivas, también se observaron desplazamientos en el histograma. Acabo de mostrarle cómo utilizar el nuevo contador de células Scepter de Millipore, que está revolucionando la forma en que los investigadores cuentan sus células.

determining-cell-number-during-cell-culture-using-scepter-cell

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El conocimiento del número exacto de células viables se requiere para muchos manipulaciones de cultivo de tejidos. Este protocolo describe cómo diferenciar entre células vivas y muertas y cuantificar las células usando un hemocitómetro. A pesar de que describe contar humana madre neurales / células precursoras (hNSPCs), que puede ser utilizado para otros tipos celulares.

Conteo de células madre neurales humanas

Determinar el número de células en cultivo es importante en la normalización de las condiciones de cultivo y en la realización de experimentos precisa cuantificación. En este vídeo, se demuestra cómo las células se contaron usando un hemocitómetro.

Contar y determinar la viabilidad de las células cultivadas

El Moxi Z contador automático de células en miniatura es un instrumento novedoso que combina el Principio Coulter con la tecnología patentada de sensor de película delgada y un algoritmo de software propietario para realizar el dimensionado y el recuento de un amplio rango de tamaño de partículas, así como para determinar el estado general de salud de monodispersas cultivos de células de mamíferos. Este protocolo se describe el uso de este instrumento para contar y evaluar la salud de los...

Determinación del recuento de células de mamíferos, el tamaño celular y la salud de la célula mediante el Moxi Z Mini contador automatizado de células

Este protocolo describe el uso de tres métodos diferentes para analizar la proliferación celular en líneas celulares de cáncer de mama. Esto incluye el uso del recuento de células convencional, la viabilidad de las células basada en la luminiscencia y el recuento de células mediante el uso de un generador de imágenes de células. Cada uno de ellos ofrece ventajas para la medición reproducible de la proliferación celular.

Comparación de tres diferentes métodos para determinar la proliferación celular en líneas celulares de cáncer de mama

Este artículo describe la cuantificación de hemocitómetros y micrografías de migración/invasión a través de dos nuevos complementos de código abierto de ImageJ: Cell Concentration Calculator y migration assay Counter.  Además, describe los protocolos de adquisición y calibración de imágenes, así como analiza en detalle los requisitos de entrada de los complementos.

Automatizado de cuantificación y análisis de los procedimientos de recuento de células usando ImageJ Plugins

El actual protocolo describe un método integrado de investigación migración de la célula de cáncer y la invasión en una única plataforma en tiempo real, proporcionando una opción fácilmente reproducible y eficiente para estudiar la morfología y movilidad de la célula.

Un flujo de trabajo Simple migración/invasión usando a un sensor automatizado de células vivas

La diafonía entre las células epiteliales mamarias y las células endoteliales contribuye de manera importante a la progresión del cáncer de mama, el crecimiento tumoral y la metástasis. En este estudio, los esferoides se han hecho de células de cáncer de mama junto con células endoteliales vasculares y / o linfáticas y demuestran su aplicabilidad como un sistema in vitro para la investigación del cáncer de mama.

Esferoides epiteliales y endoteliales mamarios como un modelo funcional potencial in vitro para la investigación del cáncer de mama

Este protocolo proporciona una guía completa para la configuración y el seguimiento cuantitativo de cocultivos, incluidas las cianobacterias fotoautótrofas secretoras de azúcar y las levaduras heterótrofas.

Ensamblaje y cuantificación de cocultivos que combinan levaduras heterótrofas con cianobacterias fototróficas secretoras de azúcar

Este artículo describe un protocolo para la caracterización mecánica de esferoides vivos dentro de una matriz 3D utilizando la microespectroscopía de Brillouin. Este método totalmente óptico permite la visualización de esferoides con resolución a microescala y propiedades mecánicas cuantitativas. Este enfoque tiene implicaciones para la fenotipización mecánica; por ejemplo, determinar estados patológicos de esferoides tumorales dentro de un microambiente 3D.

Mapeo mecánico de esferoides mediante espectroscopía de Brillouin

Existe una necesidad crítica de modelos de cáncer en 3D que capturen la diafonía heterocelular para estudiar la metástasis del cáncer. Nuestro estudio presenta la generación de estromas-epiteliales heteromulticelulares en un entorno de andamios y libres de andamios que pueden ser utilizados para estudiar la invasión y las distribuciones espaciales celulares.

Células estromales heteromulticelulares en cultivos 3D sin andamios de células de cáncer epitelial para impulsar la invasión

Aprende a contar células con el contador Scepter, un dispositivo portátil automatizado que mejora la precisión y reproducibilidad en cultivos celulares. Este método reduce el sesgo del usuario y acelera el análisis.

Determinar el número de células durante el cultivo celular utilizando el contador de células Cetro

Explorar más videos