Medición de la activación de las funciones efectoras mediadas por Fc por anticuerpos HA

Tome diluciones en serie de un anticuerpo dirigido al virus de la influenza hemaglutinina, o HA, una glicoproteína que consta de una cabeza globular y un tallo.

Agregue las diluciones en células de mamíferos transfectadas que expresen AH unido a la superficie. Los anticuerpos se unen a las regiones del tallo de HA, formando complejos inmunitarios.

Introducir linfocitos T modificados que expresen receptores Fc y codifiquen un indicador de luciferasa bajo el control del factor de transcripción NFAT.

Durante la incubación, el anticuerpo unido a HA se une al receptor Fc, mientras que la cabeza de HA se une al ácido siálico, lo que desencadena la activación de las células T y aumenta la concentración de calcio citosólico.

Esta activación inicia una cascada de señalización que da lugar a la desfosforilación de NFAT, desencadenando su translocación nuclear.

NFAT se une a sus elementos de respuesta en el genoma, impulsando la expresión de luciferasa.

Agregue un sustrato bioluminiscente permeable a las células. La luciferasa oxida el sustrato, produciendo una señal.

La disminución de la luminiscencia con la disminución de la concentración de anticuerpos confirma la activación de los linfocitos T mediada por anticuerpos específicos del tallo de HA.