Protocolo para la cría de los mosquitos (A. gambiae)

Mi nombre es Shish y soy investigador posdoctoral en el laboratorio del Dr. George OU en la Escuela de Salud Pública Johns Hopkins, en el Departamento de Microbiología Molecular e Inmunología. Voy a mostrar cómo criar mosquitos de la especie *Anopheles gambiae*. En el laboratorio, los mantenemos en una sala de insectario, que habitualmente se mantiene a 27 grados centígrados y al 80% de humedad.

La sala de insectario también se mantiene en un ciclo de 12 horas de día y 12 horas de noche para poder imitar las condiciones que existen en el medio natural. Así pues, esta es la sala de insectario que tenemos, una instalación central aquí, donde se cría este insecto. Como puede observarse, aquí hay varias bandejas con mosquitos en todas las etapas diferentes: el huevo, las distintas fases de las larvas y la pupa.

Estas bandejas contienen larvas de aproximadamente 11 o 12 días de edad, y esta es una jaula donde recolectamos los mosquitos adultos y los mantenemos con una solución de sacarosa al 10%. Para iniciar el proceso de puesta de huevos en los mosquitos, necesitamos alimentarlos con sangre, ya que los mosquitos requieren la proteína de la sangre para poner huevos. Por lo tanto, el día uno es después de que los adultos han sido recolectados en la jaula y mantenidos con sacarosa al 10%.

El día uno se debe alimentar a los mosquitos con sangre, y por eso se utiliza la alimentación con sangre mediante membrana artificial. Este es un alimentador de vidrio, que usamos para la alimentación con membrana de los mosquitos. Introducimos la sangre por el pequeño orificio que ven y queda contenida en ese recipiente.

En la parte inferior lateral hay dos boquillas, que están conectadas a un baño de agua mantenido a 37 grados. Para mantener la sangre a 37 °C y preparar el alimentador para la alimentación, tomamos un pequeño trozo de parafina. La estiramos desde los dos extremos y desde los cuatro lados, y luego colocamos esto en el extremo abierto del alimentador de vidro, de modo que forme una fina lámina de membrana que imite la piel.

Esto es lo que se denomina alimentación por membrana. Se trata de un baño de agua circulante, que mantiene el agua a 37 °C y además hace circular el agua a través del alimentador de vidrio para que la sangre se mantenga cálida a 37 °C. Por lo tanto, conectamos el alimentador de vidrio mediante los pequeños capilares y lo unimos al baño de agua circulante, y encendemos el baño para que el agua circule; el agua y la sangre nunca se mezclan, ya que se encuentran en dos cámaras separadas.

Esta es una jaula de mosquitos adultos de Phis Gambi. Este es el alimentador de vidrio, que se conecta al baño circulante, y colocamos una pinza en la parte superior de la jaula y agregamos 200 microlitros de sangre. La jaula contiene mosquitos machos y hembras.

Solo la hembra viene a alimentarse de sangre. La alimentación continúa durante aproximadamente 30 minutos. Dos días después de la ingesta de sangre, colocamos copas para huevos dentro de la jaula de los mosquitos para que pongan los huevos.

Así es como se hace. Tomamos un vaso pequeño, lo llenamos parcialmente con agua destilada, tomamos un papel y lo humedecemos, luego lo envolvemos en forma cónica y lo colocamos en el vaso que contiene el agua destilada, asegurándonos de que el chile indio se humedezca. Ahora abrimos lentamente la jaula de los mosquitos teniendo cuidado de no permitir que ninguno salga, y colocamos los vasos con huevos en su interior.

Al día siguiente de colocar los vasos dentro de la jaula, es decir, el cuarto día, se sacan lentamente de la jaula. Estos son los huevos, los negros, que también tienen algunos mosquitos muertos. Una vez que tenga los huevos listos, colóquelos en una bandeja de plástico.

En el pasado, la bandeja de plástico se llena con agua destilada. Tome el filtro con los huevos y colóquelos fuera. También agregue una pizca de alimento A, que es alimento molido para peces, y coloque la bandeja en el estante.

Debemos nivelar la bandeja el día en que comenzamos la bandeja y también identificar qué especies están aquí. Esto es después de usted, este es el día siguiente después de colocar el huevo en la bandeja. Es decir, estos tienen un día de edad, pero el protocolo real es el quinto día del día del mosquito.

Estos son los negros, que son los huevos, que simplemente van a eclosionar en larvas. Y esta es la comida para mosquitos. Para la cría de mosquitos, generalmente utilizamos tres tipos diferentes de alimentos.

El alimento A es en realidad alimento para peces molido, y este lo agregamos cuando iniciamos el cultivo de mosquitos, en el estadio X, añadiendo dos tabletas del alimento C diariamente, que es alimento para gatos comprado de Purina. Después de ocho o nueve días, cambiamos el agua de la bandeja y agregamos agua fresca. En ese momento, en lugar del alimento A, añadimos una pizca del alimento B, que no es más que alimento molido, C, es decir, alimento para gatos molido, y también agregamos dos tabletas del alimento C; los huevos eclosionan y pasan a estado de larvas.

Y existen tres etapas diferentes de las larvas. Primera en instalación, segunda en instalación y tercera en instalación. Estas son bandejas que contienen las larvas, que tienen entre cinco y seis días de edad.

Estos Ravi, que se encuentran en una etapa mucho más avanzada, de unos nueve a 10 días de antigüedad. En el transcurso, el agua ha sido cambiada y se ha agregado agua fresca y alimento nuevo. Esta bandeja contiene tanto a los adultos como a los ppe.

Estos son los adultos, como puede ver, volando bajo las mosquiteras. Y en el borde puede ver todo el equipo de protección personal de color oscuro, que va a eclosionar en los adultos. Una vez que tiene los adultos, están listos para ser recolectados en una jaula, que tiene este aspecto.

Tiene un forro de toalla de papel en el interior y una pequeña botella que contiene una solución al 10 % y una pastilla de jabón de algodón, que servirá como fuente de alimento para los mosquitos. Así que cubrimos la tapa, y este es el aparato, el aspirador, que está conectado al vacío mediante el cual recolectaremos los adultos de estas bandejas. Esta parte del aspirador está conectada aquí y en el otro extremo.

Conectado al vacío. Colocamos la jaula dentro, en la cual recogeremos los adultos en esta caja pequeña. Esta es otra parte del aspirador, que tiene un tubo largo, el cual introduciremos dentro de la bandeja de mosquitos.

El otro extremo se conectará a la jaula. Debe asegurarse de que todo esté bien ajustado, para que el vacío funcione correctamente. Cerramos la tapa y verificamos que todo esté herméticamente sellado.

Comience lentamente el equipo de fondo. Una vez que la configuración esté lista, introduzca lentamente este tubo largo dentro de la bandeja de mosquitos, asegurándose de cerrar la red y de no permitir que los mosquitos se escapen. Y como puede ver, los mosquitos están siendo recolectados en la pequeña jaula.

Lleve el tubo lentamente por todas partes para recoger todos los adultos. Ahora casi he terminado. Se han recogido todos los adultos y están todos en esta jaula, que pueden ver.

Luego, lentamente, liberamos el vacío y desmontamos el aparato de recolección. Así, estas son las mosquitos adultos de Ana Gambi, que permanecerán en esta jaula durante algunos días. Se alimentarán con sacarosa al 10 % y se les proporcionará sangre para alimentarse solo cuando necesiten poner huevos.

Acabo de mostrarle cómo colocar los mosquitos. En condiciones de laboratorio, los pasos importantes en palabras son el suministro de sangre. Luego colocar los vasos con huevos, seguir el desarrollo de los huevos y posteriormente pasarán por diferentes etapas como larvas, pupas y adultos.

Y finalmente, recolectamos los adultos. La importancia de esta técnica radica en que debemos imitar las condiciones que existen en el exterior, en condiciones naturales, para obtener mosquitos sanos, y luego infectarlos con el plasmodio y realizar diferentes tipos de estudios sobre la malaria, cuyo objetivo principal es erradicar la malaria del mundo.