Name: Un procedimiento para el estudio de la reposición de estímulo eléctrico plantar inducido por la cocaína Buscando en ratas de laboratorio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-06T18:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Aprende a inducir la recaída de búsqueda de cocaína mediante choques eléctricos intermitentes en ratas de laboratorio. Este método permite estudiar los mecanismos neurobiológicos del estrés y la recaída en adicción.

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1. Los animales y de Aclimatación Procedimientos <ol><li> Mujer ratas Long Evans, con un peso 300-325 g en el momento de llegada en el vivero, son alojados individualmente en jaulas de plástico estándar de papel reciclado que contiene ropa de cama de pellet, con tapas de malla de alambre para acomodar las botellas de agua y alimentos. </li><li> Las ratas se mantienen en un revés de luz-oscuridad calendario (luces encendidas 19:00-07:00), a una temperatura y humedad controladas vivero. </li><li> Alimentos y el agua ad libitum en las jaulas en casa durante todo el experimento. </li><li> Las ratas se les permite aclimatarse a los viveros y las condiciones de alojamiento para una semana antes de la cirugía. Durante este tiempo, las ratas no se tocan con la excepción de la rutina de limpieza, alimentación y control de peso. </li></ol> 2. Cirugía cateterismo por vía intravenosa <ol><li> Bajo anestesia de gas isoflurano, y el uso de las técnicas quirúrgicas asépticas, las ratas se preparan con catéteres de silastic en la vena yugular derecha. Las salidas de catéter en una cánula modificados (plásticos uno) en la superficie del cráneo, y la cánula se monta en el cráneo con tornillos de joyería y cemento dental. Para más detalles de los procedimientos quirúrgicos, véase 7, 8. </li><li> Al final de la cirugía, catéteres se lavan con aproximadamente 0,2 ml de una solución que contenga 50% de heparina (1000 UI) y dextrosa al 50% (25 g/50 mL). Un bloqueador de plástico se coloca sobre la abertura de la cánula para proteger a la sonda externa de los escombros, y para mantener la permeabilidad del catéter. </li><li> En el momento de la cirugía, y otra vez en el día después de la cirugía, las ratas se administraron 5 mg / kg, SC, del Ketoprofeno analgésico. </li><li> Las ratas se les permite por lo menos siete días para recuperarse de la cirugía antes de la experimentación. Durante este tiempo, las ratas no se tocan en las jaulas de casa, con la excepción de la rutina de limpieza y alimentación, y la supervisión diaria de peso y la salud general. En el último día del período de recuperación, los catéteres se enjuagan con la solución de heparina / dextrosa (sección 2.2) para comprobar la permeabilidad del catéter. </li></ol> 3. Procedimientos de comportamiento Todos los procedimientos conductuales se llevan a cabo utilizando los equipos suministrados por Med Associates Inc. (St Albans, VT). El equipo, que se encuentra en una sala dedicada, incluye un conjunto de cámaras estándar operante, cada uno contenido dentro de un recinto que atenúan el sonido. Cada cámara operante está equipado con dos palancas retráctiles, tanto elevada 6,5 ​​cm sobre el piso de varilla de acero inoxidable. A la luz de estímulo blanco se encuentra justo por encima de una palanca, y las respuestas en la palanca (la llamada "activa" de la palanca) como resultado de la iluminación simultánea de la luz de estímulo y la activación de una bomba de infusión (Razel Scientific Instruments, St. Albans VT). La bomba se encuentra en un estante justo fuera de la cámara operante, pero dentro del recinto que atenúan el sonido. La otra palanca (la llamada "inactivo" palanca) se deja extendido en la cámara a lo largo de todos los procedimientos experimentales, que respondieron a esta palanca es sin consecuencias. Por último, cada cámara está equipada para ofrecer de corriente constante, intermitente, estímulo eléctrico plantar ineludible eléctrica a través de un codificador para el suelo barra de acero. Todas las condiciones experimentales (por ejemplo, presentaciones de estímulo, las infusiones de drogas, de la descarga), así como la grabación de datos y consolidación, se llevan a cabo a través de interfaces entre las cámaras de prueba y un centro operativo de la computadora Med Software Associates (MED-IV). El experimento se lleva a cabo en cinco fases: 1) La habituación, 2) La cocaína SA, 3) libre de drogas período, 4) la extinción, y 5) Las pruebas de reposición. En todas las fases (excepto para el período libre de drogas), las ratas se transfieren para las sesiones de los días de la sala de la vivienda a las cámaras de prueba instrumental. Los animales son trasladados de forma individual, en pequeños recipientes de plástico. Comida y agua no están disponibles en las cámaras de condicionamiento operante. <ol><li> Habituación <ol><li> Veinticuatro horas antes de la cocaína primer período de sesiones SA (. Véase la sección 3.2), las ratas se les permite habituarse a las cámaras de condicionamiento operante durante una sola sesión de 2 horas, durante este período de sesiones de la palanca activa se retrae. </li></ol></li><li> Cocaína SA de formación <ol><li> Antes de cada sesión de entrenamiento todos los días, las ratas se pesan en la sala de la vivienda. Posteriormente se transfieren a las cámaras de condicionamiento operante. </li><li> Al ser colocado en las cámaras de condicionamiento operante, un muelle y el montaje de tubos (que se extiende desde la bomba de infusión de medicamentos) está conectado a la cánula cráneo montado. </li><li> Las ratas pueden autoadministrarse cocaína HCl durante todos los días de 3 horas las sesiones, para un total de 8-10 días (ya sea consecutiva o intervenir con dos días "libres" entre las sesiones de 5 y 6). </li><li> SA alternar entre la mañana (09:00-12:00) y tarde (13:00-16:00) sesiones. El calendario de sesiones SA se alterna ya que los procedimientos en las fases posteriores del experimento (es decir, la extinción y la prueba) se producen tanto en tIME del día para todos los animales (ver secciones 3.4 y 3.5), por lo que este acuerdo impide que los efectos de confusión de la hora del día siguiente en la búsqueda de drogas. </li><li> Cada sesión de entrenamiento es precedido por un período de aclimatación de 5 minutos, durante los cuales los animales son colocados en las cámaras de condicionamiento operante con la palanca activa se retractó. </li><li> Al comienzo de la sesión de entrenamiento, la palanca activa se extiende en la cámara y la luz de estímulo (que se encuentra por encima de la palanca de activos) se ilumina durante 30 s. Además, la luz de la casa está activada en este momento, y permanece iluminado durante toda la sesión. En conjunto, estos eventos de la señal de la disponibilidad de la cocaína. </li><li> Durante la sesión, las respuestas en la palanca activa se ve reforzada por una infusión de 3 s de la cocaína (0,23 mg/65 l, iv) en una relación fija-un programa de reforzamiento. Al mismo tiempo que la activación de la bomba de infusión y la administración de fármacos es una activación de 20 s de la luz por encima de la palanca de estímulo activo. Esta presentación de luz 20-s corresponde a un "tiempo fuera", período durante el cual las respuestas adicionales palanca de activos se registran, pero sin esfuerzo. </li><li> Los animales se les permite un máximo de 50 por infusiones de 3 horas de sesión. En forma rutinaria imponer este criterio en nuestro trabajo y, en nuestra experiencia, hemos encontrado que reduce en gran medida, si no se elimina, los casos de muertes por sobredosis. </li><li> Al final de cada sesión diaria, los catéteres de las ratas se lavan con 0,2-0,3 ml de heparina, solución de dextrosa (ver sección 2.2) y las ratas son devueltos a su jaula. </li></ol></li><li> Libre de drogas período <ol><li> Después de la sesión final de la cocaína SA, las ratas no se tocan (con la excepción de la rutina de limpieza, alimentación y control de peso) en su jaula por un mínimo de siete días. </li></ol></li><li> Extinción de la cocaína capacitado comportamiento <ol><li> Las ratas se trasladan a las cámaras de condicionamiento operante entre 09:00-10:00 para el entrenamiento de extinción. </li><li> La primavera y el conjunto de la tubería está conectada a la cánula cráneo montado. </li><li> De acuerdo con las condiciones para la formación de SA, cada día de entrenamiento de extinción es precedida por un periodo de aclimatación de 5 minutos, durante los cuales los animales son colocados en las cámaras de condicionamiento operante con la palanca activa se retractó. </li><li> Las ratas se le dan cuatro sesiones de 60 minutos de extinción, separados por intervalos de 30 minutos. Cada sesión de 60 minutos se inicia por los mismos hechos que se producen en el inicio de las sesiones de entrenamiento (es decir, la iluminación de la luz de la casa, la extensión de la palanca de activos, y de 30 segundos iluminación de la luz de estímulo por encima de la palanca de activos). A lo largo de las sesiones, todas las condiciones que estuvieron presentes durante el entrenamiento SA se mantienen (es decir, la respuesta-contingente iluminación de la luz de estímulo durante 20 segundos y 3-s la activación de la bomba de infusión), salvo que las respuestas de la palanca de activos ya no están reforzados con inyecciones de cocaína . Durante los intervalos de 30 minutos que separan a cada sesión de la extinción de 60 minutos, la palanca activa se retrae y la luz de la casa se apaga. </li><li> Al final de los últimos 60 minutos de sesión, las ratas son devueltos a su jaula. </li><li> Pasos 3.4.1. a 3.4.5. se repiten durante 3 días consecutivos. </li></ol></li><li> Restablecimiento de la cocaína capacitados comportamiento por el estrés estímulo eléctrico plantar <ol><li> Las ratas se trasladan a las cámaras de condicionamiento operante entre 09:00-10:00 </li><li> Al ser colocado en las cámaras de condicionamiento operante, la primavera y el conjunto de tubo está conectado a la cánula cráneo montado. </li><li> De acuerdo con las condiciones para la formación y la extinción, un periodo de aclimatación de 5 minutos es siempre, en el que las ratas se colocan en las cámaras de condicionamiento operante con la palanca activa se retractó. </li><li> Las ratas se le dan dos sesiones de 60 minutos de extinción (ver 3.4.4.) Separadas por un intervalo de 30 minutos, idénticas a las previstas en la fase de extinción. </li><li> Si después de la segunda sesión de 60 minutos el número total de respuestas en la palanca activa anterior es inferior a 15, los animales se les da una prueba para el restablecimiento después de un adicional de 30 minutos de intervalo. En este intervalo de 30 minutos, estímulo eléctrico plantar o falso estímulo eléctrico plantar (es decir, sin estímulo eléctrico plantar) se administra (ver 3.5.6.). Si el criterio de 15 o menos respuestas en la palanca activa no se logra después de la segunda sesión, una sesión de extinción (s) adicional se da antes de la prueba para el restablecimiento. </li><li> Diez minutos después de la sesión de extinción segunda de 60 minutos (o después de cualquier sesión de extinción adicional de 60 min (s) requerida para establecer el criterio de la extinción de 15 o menos respuestas), los animales son expuestos a 20 minutos del estrés intermitente estímulo eléctrico plantar eléctrica (o simulacro El estímulo eléctrico plantar) en la cámara de condicionamiento operante. El estímulo eléctrico plantar se da en un momento en que la palanca activa se retrae y luces de la casa y los estímulos se extinguen. El estímulo eléctrico plantar se entrega de acuerdo a un horario variable en un intervalo medio de 40 s (10-70 s de alcance). Cada descarga se entrega a una intensidad de 0,9 mA, y es de 0,5 s de duración. Estos parámetros del estímulo eléctrico plantar se basan en un trabajo piloto extensallevado a cabo en nuestro laboratorio para establecer el restablecimiento fiable de cocaína que buscan, con la intensidad mínima y duración de la exposición El estímulo eléctrico plantar. Bajo estos parámetros, los animales exhiben una respuesta reflexiva a saltar el choque 0,5 s, y de vez en cuando emiten una vocalización breve. Aunque los animales se observaron durante todo el periodo de shock, la intensidad del choque no es de suficiente magnitud como para inducir a los signos más pronunciados de la angustia. </li><li> Inmediatamente después de la finalización de la sesión estímulo eléctrico plantar, la palanca activa se extiende y las ratas se les permite la palanca de la prensa en condiciones de extinción (es decir, las respuestas no se refuerzan con la cocaína, pero sigue siendo causa de la iluminación de la luz de estímulo y la activación de la bomba de infusión ). Este período de tiempo se define como la prueba de reenganche y es típicamente de 1-3 horas de duración. La mayoría de la respuesta se produce en la primera parte de la sesión de pruebas (primeros 30 min-1 h), y luego se apaga durante períodos de prueba más extendida. Por lo tanto, una prueba de 1 h es suficiente para captar el efecto de reposición, con períodos más largos de prueba proveyendo un perfil más completo de la extinción de los efectos. </li><li> Cuando un diseño de medidas repetidas se emplea, cada rata se ha probado en condiciones de estímulo eléctrico plantar estímulo eléctrico plantar y farsa. Pasos 3.5.1. a 3.5.8 se repiten en un día de pruebas, y la prueba alternativa de reincorporación (estímulo eléctrico plantar o estímulo eléctrico plantar simulado) es administrada. </li></ol></li></ol> 4. Los resultados representativos: <img src="/files/ftp_upload/2265/2265fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Perfiles estilizados de respuesta para la actividad de las palancas activas e inactivas durante el entrenamiento de la auto-administración, la extinción, y prueba de reincorporación. La figura 1 presenta estilizados perfiles de respuesta operante, típico de los obtenidos en las distintas fases del protocolo experimental descrito en este documento. 1. Respuestas activas palanca <ol><li> La cocaína formación SA. Figura 1 (izquierda) muestra una curva típica de cocaína SA de formación que incluye tanto el número de infusiones y el número total de prensas de palanca activa. Las ratas suelen adquirir cocaína SA dentro de las sesiones 1-3 y, una vez que el comportamiento se ha establecido, mantener una tasa estable de consumo de drogas (por lo general menos del 20% entre el período de sesiones varianza) en sesiones posteriores. </li><li> Extinción de la cocaína capacitado comportamiento. Se puede observar en la Figura 1 (panel del medio) que en el día 1 de extinción, cuando las respuestas no son reforzados por primera vez, el número total de respuestas en la palanca de activos es un principio superior a la final de la fase de entrenamiento (que corresponde a un "estallido de extinción", así llamado), poco a poco, a lo largo de las cuatro sesiones de extinción, la respuesta disminuye. Los días 2 y 3 de la extinción, una cierta recuperación de la respuesta (en relación a la observada durante la última sesión del día anterior) se puede observar, sin embargo, las respuestas son generalmente menos que al comienzo del día anterior de la extinción, y la extinción en general, se produce más rápidamente en las cuatro sesiones de ese día. </li><li> Restablecimiento de la cocaína que buscan. Se puede observar en la Figura 1 (panel derecho), que 20 minutos de exposición al estímulo eléctrico plantar intermitente induce un aumento de no reforzado de responder en la palanca activa, en comparación con la observada en la final de la sesión anterior, la extinción. El estímulo eléctrico plantar también induce un aumento en la respuesta en relación a la observada en las condiciones en que se administra farsa estímulo eléctrico plantar. Por lo tanto, el restablecimiento de la cocaína que buscan por el estrés estímulo eléctrico plantar se puede expresar como: 1) el aumento del número de respuestas no reforzadas después de la exposición al estímulo eléctrico plantar, en relación con las respuestas en la sesión de extinción antes de estímulo eléctrico plantar o 2) el aumento del número de no reforzada respuestas después de estímulo eléctrico plantar relativo a estímulo eléctrico plantar farsa. </li></ol> 2. Respuestas palanca inactiva Se puede observar en la Figura 1 (línea roja) que, en todas las fases experimentales, hay niveles de respuesta muy bajos asociados con la palanca inactiva. Sin embargo, un ligero aumento en la respuesta a esta palanca se observa a veces después de la exposición al estrés estímulo eléctrico plantar. Incluso en los casos en que tal aumento en la respuesta se produce, el aumento de la palanca activa la respuesta tiende a ser proporcionalmente mucho mayor.

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</ol>

Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por el Consejo Canadiense de Protección de los Animales y la Universidad de Toronto comité de cuidado de los animales. La producción de este video fue patrocinado por Med Associates, Inc., que produce el instrumento utilizado en este artículo.

Durante las últimas décadas, tres variantes del procedimiento para el reintegro SA se han desarrollado para estudiar el restablecimiento de la búsqueda de drogas en ratas de laboratorio y los monos. Las diferencias que definen las variaciones de procedimiento se refieren principalmente a si la droga SA, la extinción, y las sesiones de las pruebas se realicen en el mismo día o en distintos días 1. El procedimiento que hemos descrito en este artículo se refiere comúnmente como el &quot;en-entre la&quot; variante de sesión, ya que la droga SA se produce durante las sesiones diarias (es decir, de una manera entre el período de sesiones), que están separados de la extinción y las sesiones de prueba, pero la extinción y las pruebas se realicen en el mismo día (es decir, de una manera dentro del período de sesiones) [por ejemplo, 7, 9]. Por otra parte, en la llamada &quot;entre las sesiones de&quot; los procedimientos, todas las fases del experimento ocurren de forma secuencial, de tal manera que SA, la extinción, y las sesiones de prueba se dan en días diferentes (es decir, todas las fases están entre las sesiones) [por ejemplo, 8, 10, 11]. Por el contrario, en los procedimientos completos &quot;en las sesiones&quot;, la formación SA, la extinción, y las sesiones de prueba de todos los ocurrir en el mismo día [por ejemplo, 12]. Aunque se han publicado informes de estímulo eléctrico plantar inducido por el restablecimiento de la búsqueda de drogas con diferentes variaciones del procedimiento de reintegro, hemos encontrado que este factor de estrés (por lo menos en los animales con una historia de la cocaína SA) para ser más eficaces cuando la extinción y las pruebas se realicen en el mismo día (es decir, en un &quot;plazo de entre&quot; forma de sesiones). Por otra parte, hemos tenido éxito con la obtención fiable estímulo eléctrico plantar inducido por el restablecimiento de la cocaína que buscan con un completo &quot;entre las sesiones de&quot; procedimiento, pero sólo bajo condiciones en las que los animales se alojan en las cámaras de SA durante todo el experimento 8, o por lo menos durante la extinción y la prueba 13. La desventaja de este enfoque entre período de sesiones, sobre el que se describe en el presente Protocolo, es que limita el número de sujetos que pueden ser entrenados y evaluados en un tiempo y, por tanto, disminuye la eficiencia de la recolección de datos. Aunque en las condiciones del presente Protocolo sólo un grupo de animales puede ser extinguido y probado en un momento dado, un mayor rendimiento se puede lograr asombrosa por una semana, la hora de inicio de la fase de entrenamiento SA por dos grupos de ratas. En este escenario, un primer grupo de ratas pueden entrar en la fase libre de drogas como el segundo grupo entra en la semana 2 de la formación, SA, y, en consecuencia, la extinción y las pruebas pueden ser llevadas a cabo en el primer grupo, mientras que el segundo grupo se encuentra en su droga sin fase. Este enfoque permite un uso más eficiente de los recursos y acelera el ritmo de adquisición de datos, al mismo tiempo una muy eficaz y fiable El estímulo eléctrico plantar inducido por reintegro. Es importante destacar que, en nuestro procedimiento, la extinción de la conducta ya las drogas armado y pruebas para el restablecimiento se produce en presencia de la droga asociada a las señales. A pesar de que nunca se han llevado a cabo la extinción de formación o prueba de la ausencia de indicios de drogas asociado, es nuestra comprensión, sobre la base de las comunicaciones personales, que el estrés puede de hecho ser ineficaces en la inducción de reposición cuando la prueba se produce en ausencia de señales de apagado ( al menos en el caso de los animales con una historia de la cocaína SA). Un examen sistemático de esta variable, y las implicaciones teóricas que plantea, es una cuestión importante para futuras investigaciones. Un último factor de procedimiento que garantiza comentario es que el efecto del estrés sobre la reincorporación estímulo eléctrico plantar parece ser muy sensible a las manipulaciones de contexto. Por ejemplo, el estrés estímulo eléctrico plantar sólo es eficaz en la inducción de la reincorporación de la búsqueda de drogas si se administra en el entorno en el que la droga SA y la extinción de ocurrir, es decir, estímulo eléctrico plantar no restablecer la búsqueda de drogas, si la exposición al factor de estrés se produce en un contexto nuevo, lo que sugiere una importante interacción entre el estrés y el medio ambiente de drogas en sus efectos sobre la reinstalación 14. En conclusión, los procedimientos de reintegro estímulo eléctrico plantar, como los descritos en este documento, se han utilizado con gran éxito de dilucidar los mecanismos básicos de comportamiento y neurobiológicas que regulan la relación entre el estrés y la recaída en la droga. De hecho, estos procedimientos, cuando se modificó para dar cabida a tratamientos previos farmacológicos o manipulaciones neuroquímicas orientación específica sustratos neuronales, pueden servir como herramientas poderosas para la caracterización de la neurobiología de la reincorporación a la búsqueda de drogas por el estrés.

<table><tbody><tr><td>Paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td></td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>MED-008-CT-B1</td><td></td></tr><tr><td>Cubículo atenuador de sonido de MDF extra alto y profundo</td><td>Componente del paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-018MD</td><td></td></tr><tr><td>Cámara de prueba modular estándar con tapa para infusión de fármacos y bandeja recolectora de desechos</td><td>Componente del paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-008CT</td><td></td></tr><tr><td>Piso de rejilla de acero inoxidable</td><td>Componente del paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-005</td><td></td></tr><tr><td>Luz de ambiente, con capucha, 28 V</td><td>Componente del paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-215M</td><td></td></tr><tr><td>Luz estímulo 1&amp;#8221; con lente blanco</td><td>Componente del paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-221M</td><td></td></tr><tr><td>Palanca de respuesta retráctil de perfil bajo</td><td>Componente del paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-112CM</td><td></td></tr><tr><td>Paquete SmartCtrl de 8 entradas/16 salidas</td><td>Componente del paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>DIG-716P2</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de jeringa de velocidad única, 3,33 RPM</td><td>Componente del paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>PHM-100</td><td></td></tr><tr><td>Paquete de infusión automática para rata</td><td>Componente del paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>PHM-119B-23-D</td><td></td></tr><tr><td>Armazón de entrega de fármaco</td><td>Componente del paquete básico de prueba de automedicación con fármacos para rata</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>PHM-110-SAI</td><td></td></tr><tr><td>Estimulador aversivo de onda cuadrada</td><td>Componente de estrés por descarga eléctrica</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-414S</td><td></td></tr><tr><td>Arnés con desconexión rápida patentado para piso de rejilla de acero inoxidable</td><td>Componente de estrés por descarga eléctrica</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-005-QD</td><td></td></tr><tr><td>Cable de salida para descarga eléctrica</td><td>Componente de estrés por descarga eléctrica</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>SG-219G-10</td><td></td></tr><tr><td>Software MED-PC IV</td><td>Software</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>SOF-735</td><td></td></tr></tbody></table>

un procedimiento para el estudio de la reposición de estímulo eléctrico plantar inducido por la cocaína buscando en ratas de laboratorio

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats 

El aspecto más insidioso de la adicción a las drogas es la alta propensión a la recaída. Los modelos animales de recaída, conocidos como procedimientos de reintegro, se han utilizado ampliamente para estudiar la neurobiología y la fenomenología de la recaída en el consumo de drogas. Aunque las variaciones de procedimiento han surgido en las últimas décadas, los procedimientos de reintegro más convencionales se basan en la autoadministración de drogas (SA) del modelo. En este modelo, un animal está capacitado para realizar una respuesta operante para obtener la droga. Posteriormente, el comportamiento se extingue por la retención de la respuesta-contingente de refuerzo. Restablecimiento de la búsqueda de la droga es entonces activado por un evento discreto, como una inyección de la droga de formación, re-exposición a las drogas asociadas señales, o la exposición a un factor de estrés 1. Procedimientos de restablecimiento fueron desarrollados originalmente para estudiar la capacidad de aguda no contingente exposición a la droga de capacitación para restablecer la búsqueda de drogas en ratas y monos 1, 2. Los procedimientos de reintegro han sido modificados para estudiar el papel de los estímulos ambientales, incluida la relacionada con un fármaco señales y la exposición a diversas formas de estrés, en la recaída en la búsqueda de drogas 1, 3, 4. En los últimos 15 años, un foco importante de la literatura ha sido el restablecimiento en el papel del estrés en una recaída. Una de las formas más comunes de estrés para el estudio de esta relación es la exposición aguda a la ligera, estímulo eléctrico plantar intermitente eléctrica. La capacidad de tensión estímulo eléctrico plantar para inducir el restablecimiento de la búsqueda de drogas se demostró originalmente por Shaham y sus colegas (1995) en ratas con una historia de la heroína por vía intravenosa SA 5. Posteriormente, el efecto fue generalizada a las ratas con un historial de cocaína por vía intravenosa, la metanfetamina, la nicotina y el SA, así como el etanol oral, SA 3, 6. A pesar de estímulo eléctrico plantar inducido por el restablecimiento de la búsqueda de la droga se puede conseguir de forma fiable y robusto, es un efecto que tiende a ser sensible a ciertas variables paramétricas. Estos incluyen el arreglo de las sesiones de prueba de la extinción y el restablecimiento, la intensidad y duración del estímulo eléctrico plantar el estrés, y la presencia de drogas asociado a las señales durante la extinción y la prueba de reposición. Aquí se presenta un protocolo para el estímulo eléctrico plantar inducido por el restablecimiento de la cocaína que buscan que se ha utilizado con éxito constante para estudiar la relación entre el estrés y la cocaína que buscan.

Los modelos animales de recaída, conocidos como procedimientos de reintegro, se han utilizado ampliamente para estudiar el papel del estrés en la recaída en la búsqueda de drogas. Aquí, nos informe sobre un método para inducir el restablecimiento de la cocaína que buscan en ratas de laboratorio a través de las exposiciones agudas al estímulo eléctrico plantar leve, eléctrico intermitente.

Un procedimiento para el estudio de la reposición de estímulo eléctrico plantar inducido por la cocaína Buscando en ratas de laboratorio

El aspecto más insidioso de la adicción a las drogas es la alta propensión a la recaída. Los modelos animales de recaída, conocidos como procedimientos de reinstauración, han sido...

Este video demuestra un procedimiento para estudiar sistemáticamente la relación entre el estrés y la recaída en la búsqueda de cocaína. En ratas de laboratorio, primero se entrena a las ratas para que se autominicistren cocaína por vía intravenosa mediante una respuesta de pulsión de palanca durante múltiples sesiones diarias en la fase oscura o activa de un ciclo luz-oscuridad de 12 horas. A continuación, la respuesta de pulsión de palanca reforzada con cocaína se extingue durante varias sesiones al suspender el refuerzo dependiente de la respuesta.El comportamiento de presionar la palanca extinguida se reinstaura luego mediante la exposición de los animales a descargas eléctricas intermitentes en las patas inmediatamente antes de permitirles acceder a la palanca previamente asociada con la cocaína. Aunque la reinstauración inducida por descargas eléctricas en la búsqueda de cocaína es un efecto que varios grupos de investigación han logrado de manera confiable, es un efecto que puede ser sensible a ciertas variables paramétricas. El protocolo que describiremos refleja nuestros esfuerzos exitosos por optimizar estos parámetros para lograr una reinstauración robusta y confiable, inducida por descargas eléctricas, de la búsqueda de cocaína en ratas.Los métodos que describimos aquí hoy y sus variaciones pueden utilizarse para examinar preguntas clave en el campo de la adicción a las drogas, y en particular, pueden emplearse para estudiar los mecanismos conductuales y neurobiológicos fundamentales que median la relación entre el estrés y la recaída en la búsqueda de drogas. El equipo utilizado para estudiar la reinstauración inducida por descargas en las patas de la búsqueda de cocaína incluye un conjunto de cámaras operantes estándar, cada una contenida dentro de una cabina atenuadora del sonido. Todo el equipo es suministrado por Med Associates Incorporated berated.Cada cámara operante está equipada con dos palancas retráctiles, ambas elevadas 6,5 centímetros por encima de un suelo de varillas de acero inoxidable. Una luz estímulo blanca se encuentra justo encima de una de las palancas. La llamada palanca activa, y las respuestas en esa palanca, provocan la iluminación simultánea de la luz estímulo y la activación de una bomba de infusión situada en un estante justo fuera del extremo superior de la cámara.Dentro del recinto atenuador del sonido, la otra palanca, denominada palanca inactiva, permanece extendida en la cámara. Durante todos los procedimientos experimentales, la respuesta en esta palanca no tiene consecuencia alguna. Por último, cada cámara está equipada para administrar, mediante un mezclador, una corriente eléctrica constante, intermitente y evitable, en forma de descarga eléctrica en las patas a través del suelo de barra de acero.Todas las condiciones experimentales, así como la grabación y consolidación de datos, se realizan mediante interfaces entre las cámaras de prueba y un ordenador central. Software asociado al operativo intermedio. Antes de cada sesión diaria, que ocurre durante la fase oscura o activa del ciclo luz-oscuridad, pese las ratas en la sala de alojamiento y luego transfiéralas a las cámaras operantes.24 horas antes de la primera sesión de autoadministración de cocaína, permita que las ratas se habitúen a las cámaras operantes durante una única sesión de dos horas. Durante esta sesión, la palanca activa está retraída y la palanca inactiva extendida al comienzo de las sesiones diarias de entrenamiento; conecte un ensamblaje de muelle y tubo a la cánula montada en el cráneo y coloque la rata en la cámara operante. La cánula está conectada a un catéter celesta que ha sido implantado quirúrgicamente en la vena yugular derecha para permitir la administración intravenosa del fármaco.Permita que las ratas se autominicistren cocaína durante sesiones diarias de tres horas durante un total de ocho a 10 días. Antes de cada sesión de entrenamiento, realice un período de aclimatación de cinco minutos durante el cual los animales se colocan en cámaras operantes con la palanca activa retraída. Para iniciar una sesión de entrenamiento, extienda la palanca activa hacia la cámara e ilumine la luz de estímulo durante 30 segundos.Además, active la luz de la caja en este momento y manténgala encendida durante toda la sesión. Conjuntamente, estos eventos indican la disponibilidad de cocaína durante la sesión. Las respuestas en la palanca activa se refuerzan mediante una infusión de cocaína de tres segundos según un programa de razón fija uno; la activación simultánea de la infusión, la bomba y la administración del fármaco coincide con la 22.ª activación de la luz estímulo situada encima de la palanca activa.Esta presentación de luz número 22 corresponde a un período de tiempo fuera durante el cual se registran respuestas adicionales en la palanca activa, pero no se refuerzan. Durante cada sesión de tres horas, se permite a los animales un máximo de 50 infusiones para reducir la probabilidad de sobredosis. Al final de cada sesión diaria, lave los catéteres de la rata con 0,2 a 0,3 mililitros de solución de dextrosa con heparina y luego devuélvalas a su jaula de origen.Después de la última sesión de automedicación con cocaína, deje a las ratas sin disturbios en su jaula de alojamiento durante un mínimo de cinco a siete días. Una vez transcurrido este tiempo, transfiera a las ratas a las cámaras operantes para el entrenamiento de extinción, en condiciones consistentes con las del entrenamiento previo. Antes de cada día de entrenamiento de extinción, realice un período de aclimatación de cinco minutos, durante el cual los animales se colocan en las cámaras operantes con la palanca activa retraída.Luego, someta a las ratas a cuatro sesiones de extinción de 60 minutos separadas por intervalos de 30 minutos. Cada sesión de 60 minutos se inicia con los mismos eventos que ocurren al comienzo de las sesiones de entrenamiento durante todas las sesiones. Mantenga todas las condiciones que estuvieron presentes durante el entrenamiento, excepto que ya no refuerce las respuestas en la palanca activa con infusiones de cocaína durante los intervalos de 30 minutos que separan cada sesión de extinción de 60 minutos.Retraiga la palanca activa y apague la luz de la cabina al final de la última sesión de 60 minutos. Devuelva las ratas a su jaula de alojamiento. Estos pasos se repiten durante tres días consecutivos.Transfiera las ratas a las cámaras operantes tal como se hace durante la fase de extinción, en condiciones consistentes con las del entrenamiento y la extinción. Proporcione un período de aclimatación de cinco minutos durante el cual las ratas se colocan en las cámaras operantes con la palanca activa retraída. Luego, administre a las ratas dos sesiones de extinción de 60 minutos separadas por un intervalo de 30 minutos, idénticas a las realizadas durante la fase de extinción.Si después de la segunda sesión de 60 minutos, el número total de respuestas en la palanca previamente activa es inferior a 15, someta a los animales a una prueba de recuperación tras un intervalo adicional de 30 minutos durante el cual se administre una descarga eléctrica en las patas o una descarga simulada en las patas. A partir de los 10 minutos posteriores a la segunda sesión de extinción de 60 minutos, exponga a los animales durante 20 minutos a descargas eléctricas intermitentes en las patas, estrés o descarga simulada en las patas en la cámara operante. Administre la descarga en las patas durante un periodo en el que la palanca activa esté retraída y las luces de la cabina y las luces de estímulo estén apagadas.Inmediatamente después de la terminación de la sesión de shock en los pies, extienda la palanca activa y permita que la rata presione la palanca bajo condiciones de extinción. Este período de tiempo se define como la sesión de prueba de reinstauración y suele tener una duración de una a tres horas. Al final de la sesión de prueba, retire a la rata de la cámara y devuélvala a su jaula de alojamiento.Ahora mostraremos algunos resultados representativos. Aquí se muestra una curva típica de entrenamiento en la autominiistración de cocaína que incluye el número total de infusiones y el número total de presiones en las palancas activa e inactiva. Generalmente, las ratas adquieren la autominiistración de cocaína en una a tres sesiones, y una vez establecido el comportamiento, mantienen una tasa estable de consumo de droga durante las sesiones posteriores en el primer día de extinción.Cuando las respuestas no se refuerzan por primera vez, el número total de respuestas en la palanca activa inicialmente es muy alto, pero disminuye gradualmente durante las cuatro sesiones de extinción en los días dos y tres de extinción. Puede observarse cierta recuperación de las respuestas; sin embargo, en general, las respuestas son menos numerosas que al inicio del día anterior de extinción, y la extinción generalmente avanza más rápidamente a lo largo de las cuatro sesiones de ese día. Respuestas no reforzadas en la palanca activa.Después de 20 minutos de exposición a descargas eléctricas intermitentes en las patas, el estrés induce un aumento en la respuesta en la palanca previamente activa en comparación con la palanca inactiva. Las descargas eléctricas en las patas también inducen un aumento en la respuesta en relación con lo observado. En condiciones en las que se administra una descarga simulada en las patas, una vez dominados, los procedimientos descritos pueden completarse en aproximadamente seis semanas.En nuestra experiencia, el éxito se optimiza cuando el procedimiento se lleva a cabo de manera sistemática y por manos bien entrenadas. Los procedimientos que hemos descrito aquí pueden adaptarse fácilmente para incluir diversas manipulaciones farmacológicas o neuroquímicas dirigidas a sustratos neuronales específicos. Con la incorporación de tales manipulaciones, el procedimiento de inducción y presentación del shock en las patas puede servir como una herramienta poderosa para caracterizar la neurobiología de la extinción del consumo de drogas y la recaída en la búsqueda de drogas inducida por estrés.

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Investigación

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Neuroscience

Neurociencia

Operante de administración de fármacos auto-y la preferencia de lugar condicionado (CPP) se establezcan procedimientos expansiva utilizados en la investigación para modelar los diversos componentes de refuerzo de drogas, el consumo y la adicción en los seres humanos. En este informe, se combinaron los métodos tradicionales de CPP y auto-administración como un enfoque novedoso para estudiar el refuerzo de drogas y la adicción a las ratas.

Novela Aparato y método para el fortalecimiento de Drogas

Responder a las señales de alimentos o medicamentos por pares aumenta a lo largo de un período de abstinencia y esto puede relacionarse con una mayor susceptibilidad a las conductas recaída. Aquí detallamos un procedimiento para la evaluación de esta "incubación del deseo" en las ratas que se han auto-administrado sacarosa.

Un método general para la evaluación de incubación de sacarosa en ratas Deseo

Fuente: Rich, M. T., et al. Uso de la optogenética para revertir la neuroplasticidad e inhibir la búsqueda de cocaína en ratas. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra el uso de la optogenética para inducir depresión a largo plazo (LTD) en el núcleo geniculado medial a las sinapsis de la amígdala lateral (MGN-LA), debilitando el comportamiento de búsqueda de narcóticos inducido por señales en un modelo de rata. La rata, implantada quirúrgicamente con fibras ópticas y transducida viralmente para...

Inducción optogenética de depresión a largo plazo para suprimir el comportamiento de búsqueda de narcóticos en ratas

En este artículo se describe cómo microinject vectores virales en el cerebro del ratón y luego probar en un paradigma de preferencia un lugar acondicionado que incluye una fase de adquisición, extinción y reintegro.

La microinyección estereotáxica de vectores virales que expresan Cre recombinasa para estudiar el papel de los genes diana de cocaína acondicionado Place Preferencia

Un procedimiento que permite una demostración del aumento robusto de búsqueda de drogas en ratas con restricción alimenticia se describe. Después del entrenamiento de auto-administración de heroína, las ratas pasan por un período de abstinencia, en un ambiente libre de drogas, durante los cuales son levemente comida restringida. Búsqueda de drogas se prueba a continuación, en el medio ambiente asociados con las drogas.

Un procedimiento para estudiar el efecto de la prolongada restricción de alimentos en heroína Buscando en ratas abstinentes

Este protocolo está destinado a permitir a los investigadores realizar experimentos diseñados para probar estos aspectos de la adicción utilizando los ensayos de preferencia de lugar condicionado y sensibilización conductual locomotora.

Evaluación del comportamiento de sensibilización inducida por la cocaína y la preferencia de lugar condicionado en ratones

Reactividad de CUE se conceptualiza como la sensibilidad a las señales vinculadas con experiencias de consumo de drogas que contribuyen al deseo y la recaída en seres humanos abstinentes. Reactividad de CUE está modelada en ratas por medida atencional orientación hacia estímulos asociados a drogas que se traduce en comportamiento de acercamiento apetitivo en una prueba de reactividad localización tras la administración por cuenta propia y forzada abstinencia.

Un protocolo para medir la reactividad de Cue en un modelo de rata de trastorno de uso de cocaína

Este protocolo describe la preferencia de lugar condicionada (CPP) como un modelo de recaída. Este procedimiento permite la medición de la recaída en animales de laboratorio, considerando el impacto de señales ambientales asociada a drogas como ansias y recaída en absteniéndose de adictos es actualmente el foco de los programas de tratamiento de abuso de drogas.

Reintegro de la búsqueda de drogas en ratones utilizando el paradigma de preferencia condicionada del lugar

Los métodos descritos aquí describen un procedimiento utilizado para revertir optogenéticamente la plasticidad inducida por la cocaína en un circuito conductualmente relevante en ratas. La estimulación óptica sostenida de baja frecuencia de las sinapsis tálamo-amígdala induce depresión a largo plazo (LTD). La LTD inducida optogenéticamente in vivo en ratas experimentadas con cocaína resultó en la posterior atenuación de la búsqueda de drogas motivada por señales.

Uso de la optogenética para revertir la neuroplasticidad e inhibir la búsqueda de cocaína en ratas

Se describe un procedimiento que demuestra una recaída aguda robusta inducida por la privación de alimentos a la búsqueda de heroína después de la abstinencia impuesta por el castigo. Se implementó con éxito un modelo de abstinencia impuesto por el castigo utilizando el programa de cadena de buscar y tomar para la autoadministración de heroína. Las pruebas de búsqueda de heroína se realizan después de 24 horas de estrés por privación de alimentos.

Un procedimiento para estudiar la recaída inducida por el estrés de la búsqueda de heroína después de la abstinencia impuesta por el castigo

Aprende a inducir la recaída de búsqueda de cocaína mediante choques eléctricos intermitentes en ratas de laboratorio. Este método permite estudiar los mecanismos neurobiológicos del estrés y la recaída en adicción.

Un procedimiento para el estudio de la reposición de estímulo eléctrico plantar inducido por la cocaína Buscando en ratas de laboratorio (Video) | JoVE Journal

Un procedimiento para el estudio de la reposición de estímulo eléctrico plantar inducido por la cocaína Buscando en ratas de laboratorio

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