Name: Las grabaciones fisiológicas de NMJs de salida de alta y baja en el músculo extensor de piernas cangrejo de río (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Aprende a realizar grabaciones electrofisiológicas de terminales motores tónicos y fásicos en el músculo extensor de cangrejo de río. Este método combina tinción morfológica y registro intracelular para estudiar la fisiología sináptica.

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Agradecemos al Sr. Craig D. Slaven (Departamento de Inglés de la Universidad de Kentucky) por su asistencia editorial. Con el apoyo de la Universidad de Kentucky, Departamento de Biología de la Oficina de Estudios de Grado y la Facultad de Artes y Ciencias.

1) Introducción Las neuronas motoras comunicarse con una fibra muscular en las sinapsis que se conocen colectivamente como una unión neuromuscular (UNM). NMJs se puede acceder fácilmente en la mayoría de las preparaciones del músculo del cangrejo de río. Muchos de los cangrejos de río NMJs demostrar la no adición potencial postsináptico excitador (PPSE), similar a las señales eléctricas generadas clasificados en las dendritas postsinápticos en el SNC de los mamíferos o las respuestas debajo del umbral señalado en NMJs vertebrados (Wiersma y Van Harreveld de 1938, Katz &amp; Kuffler, 1946) . El NMJs cangrejos pueden servir como modelos fundamentales sináptica para proporcionar información general en la transmisión sináptica y la diferenciación sináptica. En general, las unidades de motor regular los aspectos de la conducta animal a través del tipo de comunicación sináptica en NMJs y propiedades de los músculos. Desde la primera observación de "rápido" y contracciones "lento" en el músculo del cangrejo y la langosta más músculo (Lucas, 1907, 1917), similar diferenciación muscular contráctil ha sido descrita en otros tipos de cangrejos de río musculares como los flexores de la abdominal (Kennedy y Takeda, 1965 , b) y extensores de la extremidad (Van Harreveld y Wiersma, 1936). "Fast" contracciones de iniciar una respuesta rápida. Por ejemplo, la tapa la cola del cangrejo de río es un comportamiento rápido. "Slow" contracciones mantener los movimientos lentos y ayudar a mantener la postura (Bradacs et al., 1997). Correspondiente al "rápido" y contracciones "lento" músculo ", fásica / alto rendimiento" y "salida tónico / baja" son ampliamente utilizados para describir las neuronas motoras. La diferencia en la tasa y el tiempo de la contracción muscular se debe en parte a diferencias en la estructura sináptica presináptica y la fuerza sináptica (King et al., 1996). Proteína miofibrilar isoforma expresión también es importante en las diferencias de contracción, pero en los preparativos como la de los músculos extensores de la pierna, en la que está inervado una fibra dada por los dos tipos de neuronas motoras, la atención se centra en las diferencias de las terminales sinápticas, ya que los terminales de compartir la célula diana mismo (Mykles et al., 2002). Un estudio anterior examinó los dos axones excitatorios motor del extensor pierna y describe los fenotipos fásica y tónica (Bradacs et al., 1997). En este informe, muestran cómo realizar la disección y la obtención de grabaciones para que los demás aún puede investigar las propiedades de la diferenciación sináptica de las terminales nerviosas. Vistos con microscopio electrónico de transmisión, varias series de secciones obtenidas de la tónica y fásica terminales en el músculo extensor cangrejos pierna reveló que los terminales tónico contienen más vesículas PVP de terminales fásica, las mitocondrias son más frecuentes en las neuronas tónica, y las sinapsis en los terminales fásica más complejas que las de las sinapsis de baja producción, ya que contienen varias zonas activas con un espacio variado (Miller et al, 2002; Johnstone et al, 2008;. King et al, 1996;.. Bradacs et al, 1997). Los terminales de salida de baja tónica también son más susceptibles a la transmisión sináptica mejorar con la serotonina neuromodulador (5-HT) que son los terminales fásica (Cooper et al., 2003). El hecho de que la tónica y fásica MNJ están presentes en la misma fibra muscular hace que sea más fácil de evaluar las diferencias presináptica de una fibra muscular determinado y para abordar las cuestiones de la fatiga muscular, depresión sináptica y la diafonía sináptica. Varias preguntas quedan por abordar en esta preparación, como por ejemplo si hay diferencias en la densidad de los receptores postsinápticos y subtipos de receptores de glutamato postsinápticos en los objetivos de la tónica y fásica terminales, pero una mejor comprensión de las diferencias fundamentales en la anatomía y la fisiología de estos dos unidades de motor ayuda en la construcción de una base de conocimientos más profundos. La esperanza es que los principios fundamentales aprendidos en esta preparación sináptica será aplicable a otras sinapsis en diferentes preparaciones y mejorar las investigaciones futuras en este modelo sináptica de los cangrejos de río. 2) Los métodos <ol><li> Todos los experimentos se llevan a cabo en las piernas el primer o segundo caminar del cangrejo de río de tamaño mediano (Procambarus clarkii). Los animales son alojados individualmente en envases de plástico con agua oxigenada. La temperatura de la habitación de los animales está en el rango de 13 ° C-16 ° C. Los animales son alimentados con comida de pescado seco y el agua cambia una vez por semana. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1: Esquema de una pierna cangrejos de río a pie y los seis segmentos distales. </li><li> La porción distal de la pierna caminando en un cangrejo de río es anatómicamente dividido en seis segmentos (Figura 1). El extensor de la pierna se encuentra en el meropodite, y el conjunto de nervios que se está aislada cerca de la articulación meropodite ischiopodite. El axón tónica o fásica puede be selectiva estimulado, según sea necesario para fines fisiológicos después de estar expuestos. </li><li> Cooper y Cooper (2009) describe algunos aspectos de la disección inicial, incluyendo los métodos para exponer la Excitor de la neurona motora primer partido dentro de la región meropodite, pero su descripción no proporciona los cuidados necesarios para proteger el músculo extensor de los daños, como lo fue no es necesario para hacer frente a la preparación muscular abridor. Con el fin de proteger a los extensores de la pierna caminando primera o la segunda se elimina de los cangrejos de río, que mide 10.6 cm de longitud corporal (Atchafalaya Biological Supply Co., Raceland, LA), mediante la inducción de los animales para automatizar la extremidad con pellizco con fuerza distal al plano de fractura en el segmento de ischiopodite. La pierna se coloca en el plato con la disección lateral (lado exterior) de cara al espectador. El partido de ida se dio la vuelta hasta que el espectador puede estar seguro de la parte externa (lateral) hacia arriba en la placa de la disección, por lo general con la parte arqueada hacia arriba (Figura 2). Colocar la pierna en un pedazo de papel de seda hace que sea más fácil girar la preparación al hacer estos cortes. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2: La parte lateral de la meropodite, por lo general el lado que se arquea, se dirige hacia arriba en la placa de disección .. </li><li> Con un interruptor de hoja de bisturí y tenedor, una hoja de afeitar afilada se utiliza para grabar la cutícula hasta que estén atravesando en el modelo que se muestra en la Figura 3 para el segmento de meropodite. Hay que tener cuidado de no cortar demasiado distal en el dorso ventral para cortar por la articulación meropodite-carpopodite. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3: El segmento de meropodite con las líneas de un arquetipo de texto para el grabado de la ventana de la cutícula. La preparación se coloca en solución salina. El plato debe tener una disección Sylgard (Dow Corning) revestimiento en la parte inferior (1 cm de grosor). El Sylgard se utiliza de modo que los pasadores de insectos pueden ser atrapados en él para la celebración de la preparación todavía. En este punto, un alfiler se ha quedado atascado en el medio del segmento carpopodite y en la cara dorsal del segmento ischiopodite (Figura 4). Preparados disecados se bañan en una solución salina estándar de cangrejos de río, modificado a partir de solución de Van Harreveld s (1936), que se hace con 205 NaCl; 5.3KCl; 13,5 CaCl2, 2H 2 O, 2,45 de MgCl 2, 6H 2 O, 5 HEPES y se ajusta a pH 7,4 (en mm). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4: El segmento de meropodite con la ventana de corte siendo levantado. Anote la ubicación de los pasadores de la disección. </li><li> La cutícula se levanta suavemente en la región distal y las fibras musculares se cortan lejos de la cutícula, haciendo movimientos hacia la base de la pierna. La cutícula se puede quitar. </li><li> El apodema (tendón) se corta en la articulación meropodite-carpopodite. Un perno se coloca en la superficie interna del tendón flexor de mostrar que el corte se debe hacer (Figura 5). El tendón se luego se pellizcó en el que se cortó con unas pinzas y el músculo flexor arrancó levantando en dirección caudal (Figura 6), dejando al descubierto el nervio principal de la pierna y el músculo extensor. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 5"> Figura 5: El apodema del músculo flexor se destaca por el desplazamiento desde el flexor con un alfiler. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig6.jpg" alt="Figura 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 6"> Figura 6: El apodema del músculo flexor se corta y se retira con cuidado para no dañar el nervio principal de la pierna. </li><li> El nervio principal de la pierna se corta en la articulación meropodite-carpopodite y cuidadosamente hacia atrás sobre el músculo extensor. La superficie medial del músculo se utiliza en este estudio. La separación de los nervios a los músculos extensores de la pierna el nervio principal se puede mejorar, tirando suavemente el muñón distal del nervio principal pierna a un lado de la preparación. Al pelar el nervio principal de la pierna de nuevo sobre el músculo extensor, pequeñas ramas del axón puede ser necesario cortar. Estas son las ramas de las neuronas motoras inhibitorias del músculo extensor. El paquete más grande ramificación del nervio pierna principal, cerca del extremo proximal de la meropodite es el conjunto de nervios pequeños de interés. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig7.jpg" alt="Figura 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 7"> Figura 7: El nervio principal de la pierna se corta y se retiró en dirección proximal. Este conjunto de nervios que se puede ver con la tinción de azul de metileno (Figura 8) o con 4-Di-2-ASP tinción fluorescente (Figura 9). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig8.jpg" alt="Figura 8" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 8"> Figura 8: El músculo extensor manchada con azul de metileno. Tenga en cuenta las ramificaciones del axón y lados axones fácilmente visibles en el nervio. Flechas rojas demarcar la pista de los nervios. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig9.jpg" alt="Figura 9" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 9"> Figura 9: Los axones de las manchas del nervio motor de 4-Di-2-ASP. El axón tónica es más brillante visible debido a la mayor contenido mitocondrial. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10a.jpg" alt="Figura 10A" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 10A"> Figura 10A: terminales de las neuronas individuales fásica y tónica teñidas con 4-Di-2-ASP. Tenga en cuenta las varices en las terminales de tónica y la naturaleza fina de los terminales fásica. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10b.jpg" alt="Figura 10B" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 10B"> Figura 10B-Tonic señaló <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10c.jpg" alt="Figura 10C" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 10C"> Figura 10C-fásica señaló </li></ol> 3) perfiles fisiológicos <ol><li> Para observar el potencial postsináptico excitador (PPSE) de las neuronas tónica o fásica, uno de los axones aislados en el conjunto de nervios que es estimulado por un electrodo de succión (Figura 11) conectado a un estimulador Grass, mientras que el potencial intracelular en el músculo son monitoreados (Johnstone et al., 2008). La estimulación a 70 Hz se aplica a la tónica del axón con el fin de promover una respuesta facilitada por el NMJs bajo rendimiento, o un solo pulso (1 Hz) se aplica a los axones fásica con el fin de obtener grandes PPSE de la salida de alta NMJs como se muestra en la Figura 12. El PPSE se registran en una computadora a través de una interfaz PowerLab/4s. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig11.jpg" alt="Figura 11" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 11"> Figura 11: electrodo de estimulación se coloca sobre un solo axón en el conjunto de nervios. Tenga en cuenta la línea verde sobre los dos principales axones. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig12.jpg" alt="Figura 12" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 12"> Figura 12: los potenciales postsinápticos (EPSPS) de las neuronas o tónico fásica como las obtenidas por registros intracelulares. </li><li> Investigación en la naturaleza de facilitación sináptica y la depresión sináptica puede ser abordado por varios paradigmas experimentales con el NMJs de salida de alta y baja. La facilitación de la NMJs baja producción depende de la frecuencia, como se muestra para los pulsos de 20, 40 y 60 Hz de aproximadamente 20 estímulos (Figura 13). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig13.jpg" alt="Figura 13" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 13"> Figura 13: PPSE en respuesta a un tren de pulsos de estimulación dado con tres frecuencias diferentes de 20, 40 y 60 Hz en solución salina normal, cangrejos de río. </li><li> La tasa de depresión sináptica a la frecuencia de estimulación se relaciona también con la NMJs de alto rendimiento. La figura 14 muestra un continuo de 5 Hz de estimulación presionando la UNM más de 30 min. Con mayor frecuencia de estimulación, la preparación se deprimen con mayor rapidez (Bradacs et al., 1997). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig14.jpg" alt="Figura 14" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 14"> Figura 14: Amplitud de EPSP de la respuesta fásica durante 5 Hz estimulación para inducir a la depresión. </li></ol> 4) Las respuestas cuántica <ol><li> Un procedimiento similar al descrito para el músculo del primer partido de los cangrejos de río (Cooper y Cooper, 2009) se utiliza en esta preparación. El PPSE cuántico directamente sobre las regiones de identificación de las terminales nerviosas se registran mediante la colocación de la luz de un electrodo de grabación de la macro-parche en varices sináptica visualiza con el colorante vital 4-Di-2-Asp (5 M, 5 min de tratamiento, Cooper et al, 1995;. Magrassi et al, 1987).. El espontáneo, así como las respuestas evocadas cuántica se puede grabar a lo largo de las terminaciones nerviosas. El evocada y espontánea potenciales sinápticos se registran con el electrodo de macro-parche (Dudel, 1981; Wojtowicz et al, 1991;. Mallart, 1993). Kimax de vidrio (diámetro exterior: 1,5 mm) fue detenido y pulido al fuego para producir puntas de parche con un diámetro interior de 10 a 20 micras (Figura 15). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig15.jpg" alt="Figura 15" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 15"> Figura 15: La luz de un electrodo de grabación de la macro-parche .. La luz del electrodo se llena con el medio baño. El amplificador es el mismo que el utilizado para las grabaciones intracelular antes mencionados. Electrodo y la resistencia del sello puede ser determinada por los impulsos de prueba que pasa corriente a través del electrodo. En nuestros experimentos, las resistencias de cierre varió desde 0,3 hasta 1,0 MOhm y la resistencia del electrodo varió desde 0,5 hasta 1,0 MOhm. Resistencia del sello pueden ser monitoreados a lo largo de la grabación. </li><li> Recuento directo de eventos cuantal es posible con frecuencias baja estimulación. Para cada respuesta evocada, el número de eventos cuánticos pueden ser fácilmente determinadas por los terminales de salida bajo (Figure 16). Estos conteos directos pueden ayudar a estimar el contenido medio cuántica (Del Castillo y Katz, 1954;. Cooper et al, 1995). Desde el NMJs evocados de alto rendimiento producen varios acontecimientos evocados cuántica, la amplitud media o la zona de las deflexiones, junto con la amplitud de pico o área promedio de los eventos espontáneos, se puede utilizar para aproximar el contenido medio cuántica (Cooper et al. , 1995). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig16.jpg" alt="Figura 16" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 16"> Figura 16 rastros registrados focal de un fásica y tónica MNJ. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig17.jpg" alt="Figura 17" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 17"> Figura 17 </li></ol>

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Physiol. 35, 310-331 (1907).</li><li>Lucas, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+summation+of+propagated+disturbances+in+the+claw+of+Astacus+and+on+the+double+neuromuscular+system+of+the+abductor.">On summation of propagated disturbances in the claw of Astacus and on the double neuromuscular system of the abductor.</a> J. Physiol. 51, 1-35 (1917).</li><li>Magrassi, L., Purves, D., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+probes+that+stain+living+nerve+terminals.">Fluorescent probes that stain living nerve terminals.</a> J. Neurosci. 7, 1207-1214 (1987).</li><li>Millar, A. G., Bradacs, H., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inverse+relationship+between+release+probability+and+readily+releasable+vesicles+in+depressing+and+facilitating+synapses.">Inverse relationship between release probability and readily releasable vesicles in depressing and facilitating synapses.</a> J. Neurosci. 22, 9661-9667 (2002).</li><li>Millar, A. G., Zucker, R. S., Ellis-Davies, C. G., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sensitivity+of+neurotransmitter+release+differs+at+phasic+and+tonic+synapses.">Calcium sensitivity of neurotransmitter release differs at phasic and tonic synapses.</a> J. Neurosci. 25, 3113-3125 (2005).</li><li>Msghina, M., Govind, C. K., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+structure+and+transmitter+release+in+crustacean+phasic+and+tonic+motor+neurons.">Synaptic structure and transmitter release in crustacean phasic and tonic motor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 1374-1382 (1998).</li><li>Msghina, M., Millar, A. G., Charlton, M. P., Govind, C. K., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+entry+related+to+active+zones+and+differences+in+transmitter+release+at+phasic+and+tonic+synapses.">Calcium entry related to active zones and differences in transmitter release at phasic and tonic synapses.</a> J. Neurosci. 19, 8419-8434 (1999).</li><li>Mykles, D. L., Medler, S. A., Koenders, A., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibrillar+protein+isoform+expression+is+correlated+with+synaptic+efficacy+in+slow+fibres+of+the+claw+and+leg+opener+muscles+of+crayfish+and.">Myofibrillar protein isoform expression is correlated with synaptic efficacy in slow fibres of the claw and leg opener muscles of crayfish and.</a> 205 (4), 513-522 (2002).</li><li>Sparks, G., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5-HT+offsets+homeostasis+of+synaptic+transmission+during+short-term+facilitation.">5-HT offsets homeostasis of synaptic transmission during short-term facilitation.</a> J. Applied Physiol. 96, 1681-1690 (2004).</li><li>Sohn, J., Mykles, D. L., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomical,+physiological+and+biochemical+characterization+of+muscles+associated+with+the+articulating+membrane+in+the+dorsal+surface+of+the+crayfish+abdomen.">The anatomical, physiological and biochemical characterization of muscles associated with the articulating membrane in the dorsal surface of the crayfish abdomen.</a> J. Exp. Zool. 287, 353-377 (2004).</li><li>Tsien, R. W., Harata, N. C., Choi, S. W. P. y. l. e., Aravanis, A. M., AM, G. C. h. e. n. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicles,+quanta+and+synaptic+plasticity.+Molecular+Mechanisms+of+synaptic+function.">Vesicles, quanta and synaptic plasticity. Molecular Mechanisms of synaptic function.</a> , (2001).</li><li>Van Harreveld, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physiological+solution+for+freshwater+crustaceans.">A physiological solution for freshwater crustaceans.</a> Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 34, 428-432 (1936).</li><li>Van Harreveld, A., Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+triple+innervation+of+the+crayfish+muscle.">The triple innervation of the crayfish muscle.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 22, 667-667 (1936).</li><li>Wiersma, C. A. G., Van Harreveld, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+the+frequency+of+stimulation+on+the+slow+and+fast+contraction+in+crustacean+muscle.">The influence of the frequency of stimulation on the slow and fast contraction in crustacean muscle.</a> Physiol. Zool. 11, 75-81 (1938).</li><li>Wojtowicz, J. M., Smith, B. R., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+recruitment+of+silent+synapses.">Activity-dependent recruitment of silent synapses.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 627, 169-179 (1991).</li></ol>

Hemos demostrado en este informe la manera de analizar, registrar y cuantificar las respuestas sinápticas en una preparación de cangrejo de río único neuromuscular en la que dos terminales de alta y baja producción-inervan la misma fibra muscular. Los preparativos neuromuscular en el cangrejo de río ofrecen muchas ventajas sobre los vertebrados uniones neuromusculares, ya que sólo unas pocas neuronas motoras excitatorias son necesarios para inervar el músculo, y desde las neuronas son identificables desde la preparación hasta la preparación (Atwood, 1976). Además, el neurotransmisor excitatorio es el glutamato, y el potencial postsináptico excitador (PPSE) se clasifican, por lo que las propiedades biofísicas de los hechos calificados son análogas a las dendritas de las neuronas en el SNC de los vertebrados. Las corrientes cuántica, sin embargo, se puede controlar directamente en los sitios postsinápticos (Cooper et al., 1995). 5 Hz estimulación repetitiva del nervio fásica da lugar a grandes PPSE que se convierten en muy deprimido después de varios minutos. Este tipo de depresión es común en los artrópodos fásica las uniones neuromusculares (Atwood y Cooper, 1996). La presencia de los terminales tónico junto a los terminales fásico permite evaluar si el objetivo postsináptica es modificado en gran medida durante y después de la depresión de las neuronas motoras fásicas. Además, los terminales de salida de baja proporcionar una preparación buena para investigar los mecanismos que subyacen a la facilitación sináptica (Desai-Shah et al, 2008;. Desai-Shah y Cooper, 2009) Los terminales de salida de alta proporcionan un campo de juegos para investigar la modulación de la tasa de depresión sináptica y el proceso de recuperación. Preparaciones accesible y viable debe ayudar a descifrar los mecanismos detrás de la depresión sináptica. En esta preparación cangrejos extensor en las piernas, la aplicación exógena de la serotonina es otra herramienta para investigar la recuperación de la depresión sináptica y, potencialmente, un medio de fomentar la investigación en la movilización de grupos de vesículas sinápticas. Esta preparación proporciona varias ventajas experimentales, ya que las fibras musculares individuales están inervadas por neuronas motoras, tanto fásica y tónica. Dado que la serotonina aumenta el número de vesículas que se liberan con el estímulo provocado, y puesto que favorece la recuperación durante la depresión, es evidente que hay una cierta modulación de las piscinas de la vesícula para aumentar la probabilidad de que la fusión con la presencia de la serotonina (Johnstone et al., 2008 ; Logsdon et al, 2006;. Sparks et al, 2004).. Modelos que explican la dinámica de los grupos de vesículas dentro de la terminal nerviosa presináptica durante la estimulación de baja frecuencia, en oposición a un estado de depresión, también tienen que ser considerados entre los distintos protocolos experimentales que son posibles con esta preparación. Se ha observado en otros sistemas que alrededor del 30% del fondo de la vesícula se somete a un reciclaje rápido, mientras que el resto de las vesículas reciclada a través de un camino lento de reciclaje tradicionales a través del retículo endoplásmico (Harata et al, 2001;. Tsien et al. , 2001). Como caminos de doble también puede estar presente en este sistema. Si se carece de ATP en el estado depresivo de la terminal presináptica, luego de atraque y desatraque, no podría ser capaz de producir, por lo que muchas vesículas más descargado que permanecen en la superficie sináptica. Desde hace más vesículas se libera rápidamente cuando los terminales están expuestos a 5-HT, es factible que más están contenidas dentro de la piscina fácilmente liberable (RRV). Sin embargo, en el estado de depresión, con una reducción de la ATP, el acoplamiento y desacoplamiento puede ser bloqueado, incluso en presencia de 5-HT, que a su vez deja vesículas descargan en la superficie sináptica. Dado que los datos preliminares sugieren que más vesículas se liberan en el tiempo con la exposición prolongada 5 HT y la estimulación, la distribución de la piscina de la vesícula de los caminos de reciclaje rápido y lento puede ser sesgada a tener vesículas para un nuevo lanzamiento (de Johnstone et al. , 2008; reseñas-Desai-Shah et al, 2008;. Desai-Shah y Cooper, 2009) Con las técnicas de las grabaciones macropatch focal de las corrientes postsinápticas y las medidas de los cuantos de una sola de las regiones definidas de la terminal del nervio motor, uno puede hacer preguntas para determinar si la depresión sináptica se está produciendo como consecuencia del menor número de vesículas de ser liberado o por alteraciones de la función de los receptores postsinápticos. Se ha demostrado que las vesículas son más sensibles a la fusión en la UNM fásico de esta preparación para una exposición de calcio equivalente (Miller et al. 2005), lo que explica probablemente por el mayor contenido medio cuántica de los terminales fásica (Msghina et al. , 1998, 1999). Además, las diferencias en el frequenin calcio de unión a proteínas (Jeromin et al., 1999) y la ultraestructura (King et al., 1996) contribuye a la eficacia sináptica diferencial (Cooperet al., 2003). Algunos estudios previos han explorado el fenotipo muscular de las fibras de los músculos extensores (Bradacs et al, 1997;. Cooper et al, 2003).. Al comparar la regulación de la diferenciación muscular de los tipos de fibras puramente tónica y fásica en el cangrejo de río para los tipos de fibras mixtas, al igual que para el extensor pierna que está debidamente inervadas, podría proporcionar pistas sobre la expresión muscular fenotipo y la regulación (LaFramboise et al, 2000;. Sohn et al, 2000;. Griffis et al, 2001;. Mykles et al, 2002).. Muchas de las preguntas fundamentales quedan por resolver en la neurobiología, y esta preparación puede ayudar a hacer frente a algunos de ellos. Algunos temas de interés en el campo hoy en día que pueden ser abordados con el extensor en la pierna son: 1) Determinar los mecanismos celulares que subyacen a la depresión sináptica de alta terminales de salida (es la depresión debido a la reducción de Ca2 + de entrada, la falta de una autoridad competente fácilmente liberable de vesículas (RRV) de tenis, y / o post-sináptica alterada receptividad?) 2) Determinar la función mecánica de 5-HT cuando se aplica después de la inducción de la depresión sináptica para promover una recuperación más rápida, y 3) Determinar si las formas de la cuántica corrientes que surgen de la estimulación de las terminales fásica se alteran durante la inducción de la depresión a la dirección de los componentes pre-y post-sináptica de la depresión sináptica. Este MNJ es importante para la investigación en curso y futuros investigadores, ya que nos permite obtener la información pertinente que se ocupa de los mecanismos de subalterno de rendimiento sináptica medido directamente en los sitios de liberación. La investigación actual en esta área es proporcionar información sobre la modulación de la depresión sináptica de 5-HT y la dinámica de las piscinas de la vesícula. Dichos temas se refieren a los fundamentos básicos de la transmisión sináptica relevante para todos los sistemas neuronales.

<ol><li> Cangrejo de río (Procambarus clarkii). Atchafalaya Biological Supply Co., Raceland, LA., EE.UU.. </li><li> Estándar cangrejos salinos: <ul><li> Modificado de la solución de Van Harreveld (1936). (En mM) 205 NaCl, 5,3 KCl, CaCl2 13,5 2H 2 O, 2,45 de MgCl 2 6H 2 O, 5 HEPES y ajustado a pH 7,4 </li></ul></li><li> Herramientas de disección: Bellas # 5 pinzas, tijeras finas, titular de la hoja del cuchillo, clavos # 26002-20 insectos (todos obtenidos de herramientas de Ciencias Artes (EE.UU.), Inc., 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404 a 1139) </li><li> Plato Sylgard disección recubierto, un plato de grabación ya sea construida con electrodos de succión o de utilizar un electrodo de succión y manipulador de las anteras de mantener un electrodo de succión. </li><li> Microscopio de disección con función de zoom para las grabaciones intracelular. Para la grabación de coordinación en los terminales de visualizar un microscopio compuesto con los objetivos de pie (4 x y 20x) se utiliza. Se necesita una fuente de luz Hg. </li><li> Amplificador estándar intracelular y A / D para el consejo sobre la grabación de la línea a una computadora. Las señales eléctricas se registran en la línea a una interfaz de PowerLab/4s (ADInstruments, Australia). Utilizamos el software estándar de ADInstruments llamado Gráfico o ámbito de aplicación. </li><li> Productos químicos: <ul><li> Usamos un colorante vital fluorescentes, 4 [4 (dietilamino) estirilo] N yoduro metilpiridinio (4 Di dos Asp, Molecular Probes, Eugene, OR), para visualizar las varices (Marigassi et al, 1987;. Cooper et al, 1995a. ). Todos los productos químicos de solución salina se obtuvieron de Sigma Chemical Company (St. Louis, MO). </li></ul></li><li> De registros intracelulares que utilizan tubos capilares de vidrio (Catálogo # 30-31-0 de FHC, Brunswick, ME, 04011, EE.UU.) y para los electrodos de macropatch focal que usamos Kimax-51, Kimble productos del arte. N º 34502, ID 0.8-1.1mm, longitud 100 mm. El electrodo intracelular debe tener una resistencia de 20 a 30 Mohm. El electrodo macropatch se construye mediante la ruptura de la punta de la copa después de una punta fina se realizó a partir de un extractor de electrodos. La punta de rota tiene que ser una rotura limpia perpendicular sobre 20μM de diámetro. La punta es entonces el calor pulido de 10μM diámetro interior. El eje del electrodo se ejecute más de un elemento de calefacción para hacer que se doble alrededor de 45 grados con una curva gradual. Esto produce una luz de electrodos plana o perpendicular sobre las terminales nerviosas como el ángulo con el micromanipulador se producen alrededor de otros 45 grados a la preparación. </li></ol>

las grabaciones fisiológicas de nmjs de salida de alta y baja en el músculo extensor de piernas cangrejo de río

Physiological Recordings of High and Low Output NMJs on the Crayfish Leg Extensor Muscle

Se explica en detalle cómo exponer y llevar a cabo los registros electrofisiológicos de las respuestas sinápticas de alta (fásico) y baja (tónica) las neuronas motoras que inervan la salida del músculo extensor de la pierna a pie de un cangrejo de río. Claras diferencias están presentes en la fisiología y la morfología de las terminaciones nerviosas fásica y tónica. El axón tónica contiene muchas más mitocondrias, lo que le permite tomar una tinción vital con más intensidad que el axón fásica. Los terminales tienen varices tónico, y la terminal fásica es filiforme. Los terminales de tónica son bajos en la eficacia sináptica, pero muestran dramáticas respuestas facilitadas. Por el contrario, los terminales fásicas son altos en eficacia cuántica, pero muestran la depresión sináptica con la estimulación de alta frecuencia. La salida cuántica se mide con un electrodo de macropatch focal se colocan directamente sobre las terminales nerviosas visualizado. Ambos terminales fásica y tónica inervan las fibras musculares mismo, lo que sugiere que las diferencias inherentes a las neuronas, en vez de retroalimentación diferencial retrógrada de los músculos, dan cuenta de la diferenciación morfológica y fisiológica.

Este artículo demuestra cómo llevar a cabo los registros electrofisiológicos de las respuestas sinápticas en el músculo extensor de la pierna a pie de un cangrejo de río y cómo las terminales nerviosas se visualizan para mostrar las diferencias morfológicas de alto y bajo rendimiento terminales nerviosas.

Las grabaciones fisiológicas de NMJs de salida de alta y baja en el músculo extensor de piernas cangrejo de río

Explicamos detalladamente cómo exponer y realizar registros electrofisiológicos de las respuestas sinápticas para neuronas motoras de salida alta (fásicas) y baja (tónicas)...

El objetivo general de este procedimiento es demostrar cómo exponer y distinguir los terminales motores fásicos y tónicos mediante tinción morfológica y grabación electrofisiológica en el músculo extensor del cangrejo de río. Esto se logra primero pellizcando la primera o segunda pata caminadora de un cangrejo de río de tamaño medio, extrayendo la cutícula y eliminando el músculo flexor en el segmento meita. Esto expone el músculo extensor y el haz nervioso.El segundo paso del procedimiento consiste en teñir la preparación con yoduro de tetraetilamino estéril y metilperitonio, o tetra D dos asp, para visualizar los axones y terminales nerviosos. El tercer paso del procedimiento es estimular selectivamente neuronas tónicas y/o fásicas, y simultáneamente realizar grabaciones intracelulares de PSEPs evocados en la fibra muscular. El paso final del procedimiento consiste en utilizar un electrodo focal para registrar eventos cuánticos espontáneos y evocados provenientes de los terminales.Finalmente, se pueden obtener resultados que diferencien morfológica y fisiológicamente las terminaciones tónicas y fásicas mediante microscopía de inmunofluorescencia y electrofisiología. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la fisiología sináptica en áreas como la fatiga muscular, la depresión sináptica y la comunicación cruzada sináptica. El experimento comienza seleccionando cuidadosamente el cangrejo de río de manera que se eviten sus pinzas.Desprenda la pata del cuerpo en el segmento del podio isquial. Un apretón fuerte en el segmento del podio isquial induce al cangrejo de río a autotomizarse o desprenderse naturalmente de la primera pata ambulatoria. El cangrejo de río dejará de sangrar y se devolverá a su tanque de contención.No se sacrifica el cangrejo de río. Coloque la pata sobre un trozo de papel de tejido para que la preparación pueda girarse fácilmente mientras se realizan los cortes. Gire la pata hasta que el exterior, que es el lado lateral, quede hacia arriba sobre la placa de disección.Esto generalmente tiene el lado arqueado orientado hacia arriba. Utilizando una cuchilla de afeitar afilada sujeta a un rompedor de cuchillas de bisturí, raye la cutícula dentro del segmento meita siguiendo el patrón mostrado en la figura. Tenga cuidado de no cortar demasiado distalmente en el corte de dorsal a ventral a lo largo de la articulación carpod del meita.Este corte crea una ventana en el meite por encima de los músculos de la pata subyacentes. Deje la cutícula en su lugar por ahora. Coloque la preparación en un recipiente de disección que contenga solución salina fisiológica para cangrejo de río.En este momento, coloque un alfiler en la mitad del segmento carpod y en la cara dorsal del segmento isquia pod con pinzas finas, levante ligeramente la ventana cortada en la cutícula desde el extremo distal y, utilizando la cuchilla, corte las fibras del músculo flexor separándolas de la cutícula. Continúe cortando de forma distal a proximal y, finalmente, levante la ventana de la cutícula. Para exponer el músculo extensor, debe eliminarse el músculo flexor que lo recubre.Seccione el tendón del músculo flexor desplazándolo del músculo flexor con un alfiler. Luego corte el tendón en la articulación metacarpo-carpiana. Como se muestra, tenga mucho cuidado de tirar del tendón lejos de la cavidad de la pata antes de realizar el corte, y asegúrese de cortar solo el tendón y no el nervio principal de la pata que se encuentra en el lado interno del tendón.Pinche el tendón en el lugar donde fue cortado con pinzas y separe el músculo flexor de la pata levantándolo en dirección codo. Para exponer el nervio del músculo extensor, corte el nervio principal de la pata en la articulación meropodio-carpodáctila y retire cuidadosamente el nervio principal de la pata sobre el músculo extensor. La separación del nervio del músculo extensor respecto al nervio principal de la pata puede mejorarse tirando suavemente del muñón distal del nervio principal de la pata hacia un lado de la preparación. Al retirar el nervio principal de la pata sobre el músculo extensor, puede ser necesario cortar pequeñas ramas del axón inhibitorio.El haz nervioso puede visualizarse mediante tinción con azul de metileno. Sin embargo, el azul de metileno no se utilizaría para grabaciones electrofisiológicas en esta imagen superior. Flechas rojas para marcar la trayectoria nerviosa de interés.El haz nervioso de interés es el haz más grande que se ramifica del nervio principal de la pata cerca del extremo proximal de donde se encuentra el meropodito. Observe la ramificación de los axones y los dos axones fácilmente visibles dentro del nervio. Ahora que el nervio y el músculo están expuestos, prepare el aparato utilizado para el experimento.Las grabaciones intra y extracelulares se realizan con una etapa de cabeza y un amplificador estándar. Utilizamos un amplificador modelo Axon Clamp dos B y una etapa de cabeza uno XLU. Se necesitan tres electrodos, uno intracelular y dos extracelulares.Los dos electrodos extracelulares se utilizarán para estimular el nervio y registrar eventos sinápticos evocados y espontáneos. Pule por llama los electrodos focales y dóblelos ligeramente sobre un elemento calefactor. Después de llenar un electrodo focal con solución salina, colóquelo en el porta-electrodo estimulador e inserte el cable del estimulador de modo que haga contacto con la solución salina.Esto está conectado a una unidad de aislamiento de estimulación P 15 de grass, que a su vez está conectada a un estimulador S 88 de grass. Durante las grabaciones electrofisiológicas, se utiliza el colorante vital para D dos ASP para visualizar los axones y teñirlos; intercambie la salina del baño con salina que contenga cinco micromoles de cuatro D dos ASP por colorante durante cinco minutos. Después de cinco minutos, rellene nuevamente el recipiente con salina fisiológica de cangrejo de río, coloque la preparación bajo un microscopio y utilice un objetivo Forex.Y con un ocular de 10 x, mueva el electrodo estimulante al área de interés. El siguiente paso consiste en colocar la luz del electrodo estimulante de parche macro sobre el axón fásico o tónico. Esta fotografía de una preparación teñida con cuatro colorantes, dos de los cuales son colorantes de axones, muestra que el axón tónico es más visible debido al mayor contenido mitocondrial.Los terminales tónicos presentan numerosas varicosidades y los terminales fásicos son de naturaleza más delgada bajo microscopía de fluorescencia. Y el objetivo de 20 x coloca el electrodo en el axón tónico o fásico. Aquí el electrodo se está colocando en el axón tónico.Coloque el electrodo intracelular en su micromanipulador y colóquelo dentro de una célula muscular extensora. Esto se utilizará para registrar potenciales postsinápticos excitatorios intracelulares o EPSP. Para la grabación de EPSP cualitativos.Coloque el segundo electrodo focal en un micromanipulador. Para ello, retire el electrodo intracelular anterior y su soporte, y sustitúyalo por un soporte de electrodo limpio. Utilice el micromanipulador para colocar la luz del segundo electrodo focal directamente sobre una varicosidad sináptica.La resistencia del electrodo y de la selladura se determina pasando pulsos de corriente de prueba a través del electrodo. En nuestros experimentos, las resistencias de selladura oscilaron entre 0,3 y un mega ohmio, y el rango de resistencia del electrodo fue de 0,5 a uno. La resistencia de selladura en mega ohmios puede monitorearse durante toda la grabación.Cuando esté listo para comenzar la estimulación, encienda el software scope 5.0 e inicie la estimulación del axón aislado. En el haz nervioso, el axón tónico se estimula mediante el electrodo de succión y los potenciales postsinápticos excitadores (EPSP) de la fibra muscular se registran con un electrodo intracelular o extracelular. Los EPSP se registran en una computadora mediante una interfaz power lab forest.Tras la estimulación del axón tónico, el electrodo estimulante puede moverse al axón fásico y repetirse el experimento tras la estimulación nerviosa. El electrodo intracelular registra los potenciales postsinápticos excitadores generados en respuesta a la actividad de los motoneuronas tónicos y fásicos. La facilitación sináptica de las uniones neuromusculares tónicas depende de la frecuencia de la estimulación nerviosa, como se muestra aquí para trenes sucesivos de aproximadamente 20 estímulos cada uno a una frecuencia de 60 hertz.Observe la facilitación que ocurre con múltiples estímulos. Esta figura compara las amplitudes de los PEPS generados por la estimulación del nervio tónico a frecuencias de 20 hercios en azul, 40 hercios en verde y 60 hercios en rojo; observe la marcada facilitación mostrada a frecuencias más altas de estimulación. Los terminales tónicos tienen baja eficacia sináptica, pero muestran respuestas facilitadas muy evidentes.Aquí se muestran los EPSP tónicos por separado, y luego se superponen las respuestas fásicas a la misma escala. En contraste con los terminales tónicos, los terminales fásicos tienen una alta eficacia cuantal, pero muestran depresión sináptica con estimulación de alta frecuencia. La depresión sináptica en los terminales fásicos también está relacionada con la frecuencia de estimulación, como se muestra aquí.Una estimulación continua de cinco hercios durante 30 minutos deprime la respuesta en la unión neuromuscular. Con una frecuencia de estimulación más alta, la preparación se deprimirá más rápidamente con la estimulación adecuada. La unión neuromuscular del cangrejo de río genera EPSPs sin potenciales de acción.Estos PEPS pueden utilizarse para investigar las propiedades cualitativas que componen las señales eléctricas graduadas en estos músculos. Aquí se muestran las respuestas sinápticas cualitativas del terminal tónico. Tenga en cuenta que no todos los ensayos de estimulación producen un evento cualitativo.El conteo directo de eventos cuánticos es posible con una estimulación de baja frecuencia para cada respuesta evocada. El número de eventos cuánticos puede determinarse fácilmente para las terminaciones tónicas. Al contar los eventos cuánticos, las respuestas sinápticas del motoneurona fásico pueden registrarse de la misma manera.Sin embargo, las respuestas evocadas son de naturaleza multical. El contenido cal medio se estima utilizando la amplitud media o el área de las desviaciones junto con la amplitud pico media o el área de los eventos espontáneos. Un recordatorio final: tenga cuidado al retirar el músculo flexor para no dañar el nervio que inerva el músculo extensor.Eso es todo. Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

A continuación se describen los métodos electrofisiológicos para la medición de la transmisión sináptica en la unión neuromuscular de larvas de Drosophila. Liberación evocada se inicia artificialmente mediante la estimulación de los axones de la neurona motora, y la transmisión a través de la UNM se puede medir por la respuesta postsináptica evocado en el músculo.

Los métodos electrofisiológicos para la grabación de los potenciales sinápticos de la UNM de larvas de Drosophila

Aplicación de la electrofisiología de las sinapsis accesibles proporciona una medida cuantificable de la actividad sináptica, útil en el análisis de mutantes sinápticos. Este artículo describe un método de disección utilizado para exponer la uniones neuromusculares (UNM)...

Disección y de grabación de la unión neuromuscular C. Elegans

Mediciones no invasivas de los patrones de actividad neuronal en animales de comportarse libremente se obtienen mediante la combinación de grabaciones neurofisiológicas con videografía de alta velocidad.

Grabaciones de la activación de circuitos neuronales en animales comportarse libremente

El abridor de los músculos de la pierna cangrejos de río se presenta por su importancia histórica y la versatilidad experimental en el fenotipo muscular, la fisiología sináptica y la plasticidad.

Ver histórico y demostración de Fisiología en la UNM de los músculos inaugural cangrejo de río

Los experimentos muestran un método fácil para que los estudiantes adquieran experiencia en el examen de la estructura muscular, las respuestas sinápticas, los efectos de los gradientes iónicos y la permeabilidad de los potenciales de membrana. Además, una sensorial-CNS-motor de los músculos del circuito se presenta para mostrar un medio para probar los efectos de los compuestos en un circuito neuronal.

Los potenciales de membrana, las respuestas sinápticas, circuitos neuronales, neuromodulación y la histología muscular utilizando el cangrejo de río: Los ejercicios de laboratorio para estudiantes

El propósito principal de este experimento es entender cómo las neuronas sensoriales primarias transmitir la información de los movimientos y posiciones conjuntas en la información propioceptiva de un animal. Un objetivo adicional de este informe es presentar la anatomía de la preparación mediante la disección y la visualización de las neuronas bajo un microscopio de disección.

Los órganos receptores de los músculos en el abdomen del cangrejo de río: Un ejercicio de laboratorio los estudiantes en la propiocepción

Se describe un método para medir directamente la fuerza muscular, la fuerza muscular, la cinética de contracción y fatigabilidad de los músculos esqueléticos aislados en...

Evaluación ex vivo de la contractilidad, fatigabilidad y alternancia en aislados músculos esqueléticos

Técnicas fisiológicas y anatómicas se demuestran para abordar la función y la estructura de los propioceptores articulares y los receptores de la tensión muscular en las extremidades para caminar crustáceos.

Propiocepción y la tensión en los receptores de cangrejo Limbs: Ejercicios de Laboratorio Estudiante

Neuronas sensoriales musculares están implicadas en la señalización propioceptor y también informan sobre los eventos estatales y lesiones relacionados con el metabolismo. Describimos un ratón adulto en preparación muscular del nervio vitro para estudios sobre los aferentes musculares activados por estiramiento.

Un In Vitro Mouse Adulto Preparación músculo-nervio para estudiar las propiedades de cocción de los aferentes musculares

Una evaluación funcional de la placa neuromuscular (NMJ) puede proporcionar información esencial sobre la comunicación entre el músculo y del nervio. Aquí se describe un protocolo para evaluar exhaustivamente el NMJ y músculo funcionalidad utilizando dos preparaciones diferentes músculo-nerviosa, es decir, sóleo-ciático y frénico-diafragma.

Medir la funcionalidad de la placa neuromuscular

Presentado es un protocolo para producir diferentes tipos de lesiones del nervio mediano (MN) y reparación en la rata. Además, el protocolo muestra cómo evaluar la recuperación funcional del nervio utilizando varias pruebas conductuales no invasivas y mediciones fisiológicas.

Métodos funcionales y fisiológicos de evaluación de la regeneración media nerviosa en la rata

Aprende a realizar grabaciones electrofisiológicas de terminales motores tónicos y fásicos en el músculo extensor de cangrejo de río. Este método combina tinción morfológica y registro intracelular para estudiar la fisiología sináptica.

Las grabaciones fisiológicas de NMJs de salida de alta y baja en el músculo extensor de piernas cangrejo de río

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