JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 1:30 min • March 4th, 2025
Comience con un corte de cerebro coronal prefijado, desparafinado y rehidratado que contiene neuronas en apoptosis, caracterizada por muerte celular y fragmentación del ADN.
Para detectar la muerte celular apoptótica mediante el ensayo TUNEL, se trata el corte de cerebro con la enzima proteinasa-K.
La proteinasa-K entra en las neuronas e inactiva las DNasas, evitando la degradación del ADN.
Enjuague la rebanada para eliminar las enzimas residuales.
Agregue un tampón que contenga trifosfatos de desoxiuridina marcados con colorante fluorescente, o dUTP, y la desoxinucleotidil transferasa terminal, o enzima TdT, y luego incube.
En las neuronas apoptóticas con abundantes fragmentos de ADN, la enzima TdT une estos dUTP fluorescentes a los grupos 3′-hidroxilo libres de los fragmentos de ADN.
Por el contrario, el ADN de las neuronas sanas permanece sin etiquetar.
Tiñe el tejido con DAPI, un tinte nuclear que se une al ADN de las neuronas sanas y apoptóticas, tiñendo sus núcleos de azul.
Tras la visualización, las neuronas que contienen fluorescencia azul y verde confirman la muerte de las células apoptóticas en el tejido cerebral.